[发明专利]一种蜜蜂蜂毒中低丰度蛋白质的富集方法

权利要求书

1.一种蜜蜂蜂毒中低丰度蛋白质的富集方法，其特征在于，以键合多孔聚羟甲基丙烯酸酯颗粒的六肽配体微珠为吸附基体，与蜜蜂蜂毒进行混合以吸附其中的蛋白质，然后采用PBS缓冲溶液洗涤以除去过量的高丰度蛋白质，最后用洗脱液将所述吸附基体上吸附的蛋白质进行洗脱得低丰度蛋白质富集后的洗脱液。

2.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，所述吸附基体和蜜蜂蜂毒的重量比为0.1～1∶1。

3.根据权利要求2所述的富集方法，其特征在于，所述吸附基体和蜜蜂蜂毒的重量比为0.3～0.5∶1。

4.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，所述吸附基体与蜜蜂蜂毒进行混合前，依次用水和PBS缓冲溶液进行洗涤。

5.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，所述富集方法还包括：在洗脱步骤之前用水洗涤所述吸附基体以除去蛋白质中的盐。

6.根据权利要求1所述的富集方法，其特征在于，所述洗脱步骤中用pH值为2.0～2.5的甲酸或乙酸溶液作为洗脱液；优选用0.1～0.5M的甲酸溶液作为洗脱液。

7.根据权利要求1-6任一项所述的富集方法，其特征在于，所述蜜蜂蜂毒为意大利蜜蜂的蜂毒。

8.根据权利要求1-7任一项所述的富集方法，其特征在于，所述富集方法包括以下步骤：

（1）将键合多孔聚羟甲基丙烯酸酯颗粒的六肽配体微珠依次用2～5倍重量的纯水和PBS缓冲溶液各洗涤1～3次；

（2）将蜜蜂蜂毒配制成0.5～1.5g/ml的水溶液，并与步骤（1）处理后的所述六肽配体微珠混合20～40min，离心后得吸附后的六肽配体微珠；

（3）将步骤（2）所得吸附后的六肽配体微珠依次用2～5倍重量的PBS缓冲溶液和纯水各洗涤1～3次；

（4）将洗脱液和步骤（3）所得六肽配体微珠混合进行洗脱，离心收集洗脱液得低丰度蛋白质富集后的洗脱液。

9.根据权利要求8所述的富集方法，其特征在于，步骤（4）中洗脱液的体积为所述六肽配体微珠体积的1～2倍，重复3～6次，合并收集洗脱液得低丰度蛋白质富集后的洗脱液。