[发明专利]一种珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法

权利要求书

1.一种珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于它包括以下步骤： 

（1）获得珊瑚菜无菌苗；

（2）培养供感染用的发根农杆菌；

（3）转化外植体进行共培养：取长势较好的珊瑚菜无菌苗，切取根、叶柄或叶片作为外植体，在其表面划出伤口用于感染，放入发根农杆菌菌液中浸泡，然后放入MS固体培养基中共培养，直至外植体周边出现菌斑； 

（4）诱导毛状根发生：将出现菌斑的外植体清洗后，放入含有头孢噻肟钠的1/2MS培养基中培养，定期更换1/2MS培养基，在更换的培养基中逐步降低头孢噻肟钠的浓度，直到在完全除掉头孢噻肟钠的1/2MS培养基中继续培养，获得除菌的毛根系； 

（5）毛状根的培养增殖：将除菌完全、生长快速的毛状根接种在1/2MS液体培养基中，振荡培养增殖，获得大量毛状根。

2.根据权利要求1所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于：所述步骤（1）中选择饱满的珊瑚菜种子，灭菌，后接种于MS固体培养基中培养获得无菌苗。

3.根据权利要求1所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于：所述步骤（2）中所用菌种为发根农杆菌1.2556。

4.根据权利要求1或3所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于：所述步骤（2）中发根农杆菌的感染菌液最佳浓度为OD₆₀₀=0.08。

5.根据权利要求1所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于：所述步骤（3）中所述外植体优选为无菌苗的根，其次为叶柄，再次为叶片。

6.根据权利要求1或3所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于：所述步骤（3）中珊瑚菜无菌苗放入发根农杆菌菌液中浸泡15-30min。

7.根据权利要求1所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于：所述步骤（3）中共培养时间为2-5d。

8.根据权利要求1所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于所述步骤（4）中将外植体放入含有头孢噻肟钠300mg/L的1/2MS培养基中，于25℃黑暗培养13-16d。

9.根据权利要求8所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于所述步骤（4）中在1/2MS培养基中培养每7-10d换一次培养基，最初头孢噻肟钠的浓度为300mg/L，逐步降低头孢噻肟钠的浓度为每换一次培养基降低50mg/L头孢噻肟钠。

10.根据权利要求1所述的珊瑚菜毛状根的诱导增殖方法，其特征在于：利用分光光度法测定珊瑚菜毛状根中香豆素含量的波长为325nm。