[发明专利]一种基于单核苷酸多态性标记的互花米草遗传分型方法

权利要求书

1.一种基于单核苷酸多态性标记的互花米草遗传分型方法，其特征在于，

步骤如下：

1)种群调查及取样；

2)DNA提取；

3)测序；

4)筛选种群的目标基因R59；

5)根据目标基因R59设计引物，正向引物如序列表中SEQ ID NO：1所示；反向引物如序列表中SEQ ID NO：2所示；

6)PCR扩增；

7)测序；

8)序列拼接、比对，鉴定记录单核苷酸多态性位点。

2.根据权利要求1所述的鉴定外来入侵物种互花米草种群的DNA分子标记方法，其特征在于，所述目标基因R59是通过高通量转录组测序后筛选得到。

3.根据权利要求1所述的鉴定外来入侵物种互花米草种群的DNA分子标记方法，其特征在于，所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性3min，94℃30s、54℃30s、72℃1.5min，38个循环，72℃延伸10min。

4.根据权利要求1所述的鉴定外来入侵物种互花米草种群的DNA分子标记方法，其特征在于，所述目标基因R59在互花米草种群中有7个单核苷酸多态性位点，目标基因R59基因片段如序列表中SEQ ID NO：3所示，其中7个单核苷酸多态性位点分别位于93、347、436、536、555、683、684。

5.根据权利要求2所述的鉴定外来入侵物种互花米草种群的DNA分子标记方法，其特征在于，高通量转录组测序的方法：提取样本总RNA，用Oligo(dT)的磁珠富集分离mRNA，合成双链cDNA，构建转录组测序文库，插入片段长度约为500bp,在illumina HiSeq2000测序仪上进行高通量测序，使用Trinity软件对测序片段进行拼接，从而得到基因序列。