[发明专利]枯草芽孢杆菌发酵液抑制青霉和黑曲霉生长的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种枯草芽孢杆菌发酵液的新用途，尤其是一种枯草芽孢杆菌发酵液抑制青霉和黑曲霉生长的用途。 

背景技术

霉菌毒素是霉菌在生长过程中产生的有毒次级代谢产物，主要包括黄曲霉毒素、单端孢霉烯族毒素（如T-2毒素、新茄病镰刀菌烯醇和呕吐毒素）、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A及烟曲霉毒素等。据有关部门统计，现有194份饲料及原料玉米、麦麸中，呕吐毒素、T-2毒素和玉米赤霉烯酮的污染率分别为50.0%、18.1%和26%（饲料中霉菌毒素生物降解的研究进展[J].中国农业科学2012，45（1）：153-158）。霉菌毒素主要对动物肝脏和肾脏产生毒性，动物摄食霉变的饲料后，能够引起一系列机体反应，称为“底色病”，主要表现为动物体采食量减少，生长缓慢，性成熟推迟，性欲下降，精子浓度及质量下降，产仔数降低，哺乳能力降低，流产，免疫机能下降，发病率提高，血粪等病症。目前，国内外广泛使用高岭土等矿物质作为脱霉剂，但是此种脱霉剂只能吸附制品中的霉菌毒素，并不能抑制饲料制备过程中霉菌生长，而且在吸附霉菌毒素的同时也吸附饲料中维生素、矿物质等微量元素以及一些饲料添加剂等，显著降低了饲料的营养价值和饲料在动物体中的转化率等。近年来，利用微生物的发酵产物抑制霉菌生长的研究已受到许多学者的关注，国内的研究主要有李俊霞（黄曲霉毒素B1降解菌株的筛选及鉴定[J].中国农业科学，2008，41（5）：1459-1463）等，国外抑制霉菌的报道主要集中于双歧杆菌、酵母菌等，而且多集中于黄曲霉的研究。但是，迄今为止还没有关于枯草芽孢杆菌发酵液抑制青霉和黑曲霉生长的相关报道。 

发明内容

本发明是发现了枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）(CICC No.10321)具有抑制青霉和黑曲霉作用，从而发明了枯草芽孢杆菌发酵液抑制青霉和黑曲霉生长的用途。 

本发明的技术解决方案是：一种枯草芽孢杆菌发酵液抑制青霉和黑曲霉生长的用途，所述枯草芽孢杆菌是枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株(CICCNo.10321)。 

所述枯草芽孢杆菌发酵液是按照如下方法发酵： 

a. 刮取枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株(CICCNo.10321)后琼脂板划线，培养24小时后挑取单个菌落接种于液体培养基中培养24小时，所述液体培养基为每升水中含有：胰蛋白胨18~20g、酵母粉8~10g、葡萄糖6~8、磷酸氢二钾4~6g，PH值为6.5~7.5；

b. 将菌液再次接种于与a步骤相同的液体培养基中，接种量5~10%，37℃，180~220r/min，培养24~48h；

c. 将所得培养液8000r/min，5min离心，0.22μm滤膜过滤得上清液，即发酵液。

本发明发现了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株(CICCNo.10321)对青霉和黑曲霉具有抑制作用（抑制青霉和黑曲霉的抑菌圈大于20cm以上），且抑制效果好，持续时间长。该菌株培养简单，周期短，成本低，适合于作为霉菌抑制剂，抑制饲料等易霉变物品中青霉和黑曲霉的生长，有效降低霉菌毒素在动物性食品中的残留。 

附图说明

图1为本发明实施例枯草芽孢杆菌发酵液对青霉的药敏实验照片。 

图2为本发明实施例枯草芽孢杆菌发酵液对黑曲霉的药敏实验照片。 

图3为本发明实施例枯草芽孢杆菌发酵液与其他枯草芽孢杆菌发酵液对四种霉菌抑制效果直方图（不同菌株发酵液对四种霉菌的抑菌效果直方图）。 

具体实施方式

制备枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株(CICCNo.10321)发酵液： 

a. 刮取购于中国工业微生物菌种保藏管理中心的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌株(CICCNo.10321)后琼脂板划线，培养24小时后挑取单个菌落接种于液体培养基中培养24小时，所述液体培养基为每升水中含有：胰蛋白胨18~20g、酵母粉8~10g、葡萄糖6~8、磷酸氢二钾4~6g，PH值为6.5~7.5；

b. 将菌液再次接种于与a步骤相同的液体培养基中，接种量5~10%，37℃，180~220r/min，培养24~48h；

c. 将所得培养液8000r/min，5min离心，0.22μm滤膜过滤除菌得上清液，即发酵液。