[发明专利]一种组织引导再生用胶原膜的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种组织引导再生用胶原膜的制备方法。

背景技术

牙周引导组织再生技术(guided tissue regeneration, GTR) 是目前国际上治疗牙周病最先进的技术。1982年Nymans等首先提出GTR的概念 (Nyman S.Lindhe J.Karring T,et al. Clin Periodontol.1982;9(4):290-296)，GTR技术的核心是组织引导再生膜，即通过引导膜作为空间隔离的屏障膜，在防止牙龈结缔组织细胞和结合上皮细胞向根方迁移的同时，选择性地使牙周膜细胞和牙槽骨细胞粘附于根面分化形成牙周新附着。这种方法被证明在治疗骨内和根尖疾病时较开放皮瓣清创术更能有效的获得临床附着和降低探诊深度(Kim YK, Yun PY, Kim SG, et al, Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod.2009;107: 5-11)。因此，引导膜的作用至关重要。随着GTR技术在临床越来越广泛的运用，引导膜的类型和性能已经成为制约其发展的关键因素。

根据临床需要，一种有效的引导膜应该具有适当的机械强度，以阻挡生长快速的修复组织（上皮和牙龈结缔组织）远离牙根表面，在根面维持一个受保护的空间；同时该材料应能够较好地引导牙槽骨细胞生长、分泌，形成新生骨，以增加新生牙槽骨的骨量。另外，良好的生物相容性、临床可操作性好，能够稳定固着并能保持一段足够引导组织起效的时间都是影响其应用的重要因素(Kuo SM, Chang SJ, Niu GC, et al, Applied Polymer Science. 2009; 112:3127-3134).

胶原是结缔组织的主要成分，普遍存在于哺乳动物的皮肤、肌腱、骨骼、韧带中，具有柔韧性，因其螺旋结构及保持良好的主要序列，仅引起轻微的炎性反应。胶原膜作为可吸收性膜它具有低抗原性，生物相容性好，可参与组织愈合过程，降解速率可根据需要调节等诸多优点。Cirelli 等(Wong HL, Cooke J. Dent Clin N Am .2005(49):637-659.)研究表明胶原膜具有良好的生物相容性和引导组织再生功能，而且引导种植体周围组织再生效果最佳；胶原膜经紫外线消毒后，可在－20℃ 下储存，在生物体内降解期为6-8 周，其降解由唾液酶溶解、机械性破损及上皮细胞分泌的胶原酶破坏完成。Minabe M 等(Kim M, Kim J, Lee J, et al. In Vivo, 2008,22(3): 231 - 236.)用紫外线等多种方法使胶原分子间产生交链，使胶原膜在体内降解的时间可以控制，增长其降解时间更利于较大的骨缺损。李成章等采用双抗胶原膜的制作方法可应用于成品胶原膜的加工，加工改良后的双抗胶原膜具有较高的交联程度，较强的抗酶降解能力，其形态结构特点及理化性能与牛腱胶原膜相比较更符合引导骨再生技术要求。胶原膜作为GTR的研究还有一些问题：首先是体内降解速度过快，其次相对于GTR膜的要求，胶原膜的抗张强度较小，在应用过程中容易发生塌陷而失去空间维持能力。

发明内容

本发明的目的在于一种组织引导再生用胶原膜的制备方法。

本发明所采取的技术方案是：

一种组织引导再生用胶原膜的制备方法，。包括如下步骤：

（1）将胶原溶于酸性溶液中；

（2）将步骤（1）所得溶液的pH值调至5～9；

（3）将步骤（2）所得溶液快速剪切搅拌，获得胶原乳液；

（4）将步骤（3）所得胶原乳液离心，收集溶液上面的胶原膜；

（5）将步骤（4）所得的胶原膜模具成型，冷冻干燥，采用物理或/和化学方法交联，即可。

步骤（1）所述酸性溶液为醋酸、盐酸或柠檬酸溶液，浓度为0.1mol/L～0.5mol/L。

步骤（1）所得胶原溶液的浓度为0.5mg/ml-20mg/ml。

步骤（2）所述的pH调节所用试剂为氢氧化钠溶液或氨水。

步骤（3）所述快速剪切搅拌方法为机械搅拌桨搅拌、组织捣碎搅拌。

步骤（3）所述快速剪切搅拌的速度为3000～15000r/min，时间为5s～5min。

步骤（4）所述离心的速度为1000r/min～7000r/min，时间为3～10分钟。