[发明专利]一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法及测定方法

说明书

技术领域

本发明属于生物絮凝领域，具体涉及一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法及测定方法。

背景技术

絮凝技术是目前国内外一种既经济又简便的高效水处理技术，生物絮凝剂因其具有超强的絮凝能力，而受到广泛的关注，因此是一种有着良好发展前景的新型絮凝剂。目前国内外的生物絮凝剂主要通过筛选高产絮凝剂菌株获得，我国生物絮凝剂的开发仍处于一个相对落后的阶段，生物絮凝剂的生产成本较高，针对性不强，环境适应性差，因此筛选高产絮凝剂菌株从而获得生物絮凝剂应用的前景广阔。

目前关于絮凝剂产生菌的筛选，主要将分离得到的菌株进行摇瓶发酵，并在利用高岭土悬浮液在三角瓶中筛选菌株。此方法，需要配置大量的絮凝剂发酵培养基和高岭土悬浮液，消耗大量的人力物力。筛选的过程中，通常利用分光光度计逐一检测样品的絮凝效果，耗时长，检测效率低。因此，为了提高凝剂产生菌的筛选效率，必须建立一种絮凝剂产生菌的高效筛选方法。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供一种水产用絮凝剂产生菌的筛选方法。

本发明提供的筛选方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。

同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性。絮凝活性计算公式为：絮凝率=(OD_对照－OD_样品)/OD_对照×100%。

其中，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl₂。

在本发明一个实施方案中，利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-10mL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。

其中，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10-30g/L，KH₂PO₄1-3g/L，K₂HPO₄3-7g/L，尿素0.2-1g/L，酵母膏0.2-1g/L，(NH₄)₂SO₄0.1-0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L，pH7.0-7.4。

另一方面，本发明还提供一种水产用絮凝剂产生菌絮凝率的测定方法，其为将10-100μL絮凝剂产生菌的发酵液加入装有0.5-5mL高岭土悬浮液的1-10mL EP管中，振荡1-10min，静置5-20min，取1/2处深度的液层50-200μL，加入96孔板中，用酶标仪测定550nm的光密度值。

同时以蒸馏水代替发酵液作对照，确定菌株发酵液的絮凝活性。絮凝活性计算公式为：絮凝率=(OD_对照－OD_样品)/OD_对照×100%。

其中，所述的高岭土悬浮液含有0.2-0.8wt%的高岭土和0.01-0.05wt%的CaCl₂。

在本发明一个实施方案中，利用装有0.5-5mL絮凝剂发酵培养基的1-10mL EP管对絮凝剂产生菌进行发酵培养，得发酵液。

其中，所述的絮凝剂发酵培养基含有葡萄糖10-30g/L，KH₂PO₄1-3g/L，K₂HPO₄3-7g/L，尿素0.2-1g/L，酵母膏0.2-1g/L，(NH₄)₂SO₄0.1-0.5g/L，MgSO₄·7H₂O0.1-0.5g/L，NaCl0.05-0.2g/L，pH7.0-7.4。

本发明对现有絮凝剂产生菌的筛选方法或水产用絮凝剂产生菌絮凝率的测定方法进行改进，建立了一种快速、高效、经济的获得絮凝剂产生菌的方法。该方法的产絮凝剂发酵培养过程和絮凝剂产生菌筛选过程，全部采用1-10mL EP管代替传统三角瓶，采用96孔板和酶标仪替代传统的分光光度计测定光密度值。本发明方法避免了传统筛选方法效率低，成本大，筛选劳动强度大等缺点，大大提高了絮凝剂产生菌的筛选效率，利用该方法从样品中可以筛选得到高效产絮凝剂的菌株。

具体实施方式