[发明专利]人类免疫缺陷病毒1型一步法基因分型RT-PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，涉及一种生物检测技术，尤其涉及一种用于人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）RNA的基因分型检测试剂盒。

背景技术

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒（Lentivirus），属反转录病毒（Retrovirus）的一种。该病毒破坏人体的免疫功能，导致免疫系统的失去抵抗力，从而导致各种疾病病原体得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病（即获得性免疫缺陷综合征，Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS），为一种至今无有效疗法的致命性传染病。自1981年在美国首次发现和确认以来，艾滋病已夺取超过3000万人的性命，使它成为史上最具破坏力的全球性流行病之一，截至2011年5月底世界上约有6400万人感染艾滋病毒，每天平均有7000宗新病例。目前，南亚和东南亚成为继撒哈拉以南非洲之后的第二重灾区。中国CDC估计，截止至2011年底，我国存活HIV携带者及艾滋病患者约78万人，全年新发感染者4.8万人，死亡2.8万人。疫情已覆盖全国所有省、自治区、直辖市，目前我国面临艾滋病发病和死亡的高峰期，且已由吸毒、暗娼等高危人群开始向一般人群扩散，防艾、抗艾形势严峻。

根据基因差异，可将HIV分为HIV-1型和HIV-2型。一般，HIV-1病毒是绝大多数HIV感染的病原体，HIV-2病毒主要出现在非洲，尤其是在西非地区。HIV-2的传播方式与HIV-1相同，都会发生机会性感染和AIDS，但HIV-2所致的免疫缺陷发展得较为缓慢和温和。不同地区流行的亚型不同，同一亚型在不同地区的流行态势也存在一定差异。目前，世界范围内流行的主要为HIV-1型。在美国，因为HIV-2较为少见，所以HIV-2未被列为常规检测。

医学临床上将这个过程分为四个时期：急性感染期、潜伏期、艾滋病前期和典型艾滋病期。通常采用CD4细胞计数和病毒载量作为衡量AIDS进展的指标。对于不同亚型在病毒进展方面是否存在差异还存有异议。有的研究认为不同亚型HIV感染进展为AIDS的速率不同。如塞内加尔一项研究表明，在女性感染C、D、G亚型的比感染A亚型进展为AIDS的可能性高8倍。乌干一项研究发现，成年感染者中D亚型比A亚型的CD4细胞数量更低，更易进展为死亡。也有研究认为不同亚型在疾病进展方面无明显差异。根据HIV-1基因亚型与疾病进展的相关性，可预测AIDS进展，这对于药物治疗有重要意义。在药物治疗方面，目前使用的抗逆转录病毒药物包括核苷酸逆转录酶抑制剂（RNTIs）、非核苷酸逆转录酶抑制剂（NRNTIs）和蛋白酶抑制剂（PIs）三类，主要针对欧美发达国家的HIV-1 B亚型pol基因编码的逆转录酶和蛋白酶研制设计，而其他亚型病毒株可能对该药物的敏感性上存在差异而影响疗效。

目前，中国境内流行的HIV主要为M组HIV-1型（目前境内尚未见HIV-1 N组和O组的报道，HIV-2型感染病例的报道极少），其基因型主要为B/B’、BC重组型（包括CRF 07_BC重组型和CRF 08_BC重组型）以及AE重组型（CRF 01_AE重组型）。因此，结合HIV-1不同亚型在中国的流行态势，各亚型HIV-1对艾滋病发病进程的影响等因素，对HIV-1 B亚型和AE亚型的基因分型检测具有重要的现实意义。

HIV-1的检测方法总体可分为抗体检测和病毒检测两大类。病毒检测包括细胞培养（病毒分离）、p24抗原检测和病毒核酸检测。早期对HIV-1的诊断主要是通过血清学试验检测抗HIV-1的抗体，间接地诊断HIV-1感染。目前，使用较多的HIV-1亚型分型方法有直接测序法、异源双链泳动分析法、血清学分型法和核酸检测方法等。近几年，分子生物学方法不断被应用到HIV-1的检测中，HIV的实验室诊断方法取得了很大的进展，核酸检测已经成为了HIV-1实验室诊断的发展方向。