[发明专利]丹参酮IIA通过FOXO1途径发挥抗肿瘤作用机制的应用

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及丹参酮IIA介导FOXO1依赖途径抗肿瘤机制的突破性进展。 

背景技术

FOXO1转录因子在细胞增殖与分化、DNA损伤修复、氧化应激抵抗及细胞凋亡等多种生理功能中均起到关键作用，在肿瘤抑制方面的相关研究已被广泛证实，目前被认为是肿瘤治疗领域的重要潜力靶标。FOXO1可通过调节凋亡基因、细胞周期基因、DNA损伤修复基因、氧化应激抵抗基因等一系列基因的表达决定细胞命运。当DNA损伤超过细胞修复能力时，FOXO1接收外界信号并由细胞浆转位进入细胞核，诱导促凋亡蛋白FasL、TRAIL、BIM及BCL-6等的表达，启动细胞凋亡。FOXO1介导的细胞凋亡可作为抗肿瘤药物发挥药效的重要机制，指导临床肿瘤治疗。而研究表明多种肿瘤细胞FOXO1表达或功能降低，寻找可增强或恢复FOXO1表达及功能的新型抗肿瘤药物将为临床肿瘤治疗带来新的希望。201210033624.4涉及了FOXO参与调控细胞周期中的作用。 

丹参酮(tanshinone，Tan)，为丹参根部的乙醚或乙醇提取物，是丹参的主要脂溶性有效成分。丹参酮根据其不同的化学结构分为丹参酮I(I)、丹参酮IIA(II)、丹参酮II B(III)、隐丹参酮(IV)等15种成分，其中以丹参酮IIA(TSA)活性最为突出。丹参酮IIA结构式为； 

分子式为C₁₉H₁₈O₃。99121460.9公开了丹参酮IIA对各种肿瘤如白血病、肺癌、脑胶质瘤、软骨肉瘤、卵巢癌、结直肠癌、胃癌、胰腺癌、膀胱癌、喉癌、鼻咽癌等具有不同程度的疗效；200310121058.3公开了丹参酮IIA在动脉粥样硬化、心肌梗死、冠心病、肿瘤等治疗药物中的应用；200710011736.9公开了丹参酮IIA磺酸钾用于制备预防和治疗心肌缺血缺氧、脑缺血缺氧、改善微循环、增强记忆及相关疾病药物的用途；201110092218.0公开了丹参酮IIA或其药物学上可接受的盐对肺高血压的良好治疗作用；201210008431.3公开了丹参酮IIA在制备治疗p53突变或缺失肿瘤药物中的应用。 

发明内容

本发明的目的是阐明丹参酮IIA的抗肿瘤作用机制，即丹参酮IIA通过FOXO1依赖途径发挥抗肿瘤作用。PCR和Western Blot实验结果显示丹参酮IIA能够时间依赖性的增加FOXO1mRNA及蛋白水平表达；免疫荧光实验结果显示丹参酮IIA可以促使FOXO1蛋白由细胞浆转运入细胞核。MTT、Hoechst染色及TUNEL实验结果显示，FOXO1siRNA沉默A549细胞内源性FOXO1可以显著逆转丹参酮IIA在人非小细胞肺癌细胞株A549上的细胞毒作用、DNA损伤作用和凋亡诱导作用。 

附图说明

图1；A，丹参酮IIA时间依赖性的提高A549细胞FOXO1mRNA水平；B，丹参酮IIA时间依赖性的提高FOXO1蛋白水平。 

图2；丹参酮IIA可诱导FOXO1蛋白由细胞浆转运进入细胞核。 

图3；FOXO1基因沉默可以显著降低丹参酮IIA对A549细胞的细胞毒作用。 

图4；FOXO1基因沉默可以逆转丹参酮IIA对A549细胞的DNA损伤作用。 

图5：FOXO1基因沉默可以显著逆转丹参酮IIA诱导的A549细胞凋亡。 

具体实施方式

实施例1.PCR实验 

实验材料：