[发明专利]一种辣椒无菌苗培养技术

说明书

 

技术领域

一种辣椒无菌苗培养技术，属于生物技术领域，更具体的说是一种在现有辣椒无菌苗培养技术的基础上，增加一道无菌水震荡浸种的工序，排毒充氧，促进芽苗生长，提高无菌苗培养效率的方法。

 

背景技术

无菌外植体的获得是植物组织培养的重要环节，可用于原生质体融合、细胞培养、离体快繁及植物转基因等方面。双子叶植物无菌外植体的获取多采用的是将种子灭菌后转变为无菌苗后，取其叶片、下胚轴进行离体快繁或转基因研究，因而，无菌苗的培养周期及群体的整齐程度成为制约后续试验环节的瓶颈。目前，辣椒无菌苗获得一般都采用自来水清洗→乙醇消毒→氯化汞消毒→无菌水清洗→培养基接种的传统程序。这种方法的缺点在于无菌苗生长慢，成苗时间长，效率低。经分析，我们认为，上述方法无菌苗生长不良的原因一是在经过氯化汞消毒后，种子表面或内部残留的氯化汞，对种子产生毒害，影响种子的生活力；二是将种子接种在琼脂培养基上，由于接种深浅不同、体位不同等原因，使得种子吸水缓慢且不够均匀，导致出苗缓慢且大小不一，工作效率低下。

发明内容

一种辣椒无菌苗培养技术的发明目的是，针对现有辣椒无菌苗培养技术的不足，提供一种高效率的辣椒无菌苗培养新技术。本发明的特点是在现有技术的基础上，在辣椒种子接种之前增加一道无菌水震荡浸种的操作，提高辣椒无菌苗的成苗速度、出苗率及整齐度。

本发明是这样实现的：

一种辣椒无菌苗培养技术包括自来水清洗、超净台消毒、乙醇消毒、氯化汞消毒、无菌水清洗、培养基接种工序，其特点在于，在培养基接种之前加入了一道无菌水振荡浸种的工作，其整个操作的程序变成自来水清洗→超净台消毒→乙醇消毒→氯化汞消毒→无菌水清洗→无菌水震荡浸种→培养基接种共七道工序，具体步骤如下：

①自来水清洗：将种子装在尼龙种子袋中，置于自来水下冲洗3-5分钟。

②超净台消毒：将种子袋置于超净台内的组培空瓶内，喷洒75%酒精进行台面及空间消毒，开启紫外灯、打开无菌风开关，灭菌30min。

③乙醇消毒：用75%酒精浸没组培瓶内种子袋，消毒1min。

④氯化汞消毒：将种子转入0.1%氯化汞溶液中，消毒15min。

⑤无菌水清洗：将种子转入无菌水中摇晃清洗30s。

⑥无菌水浸种：将种子转入无菌水中，30℃振荡浸种24hr。

⑦接种：将种子接种于仅含琼脂粉的培养基表面，25℃催芽。

一种辣椒无菌苗培养技术的有益效果：本发明在现有技术基础上，增加无菌水震荡浸种环节，可以产生如下的作用：一是24hr的浸种使种子消毒时残留在种子上的氯化汞得以充分释出，起到排除毒素的作用；二是通过浸种使辣椒种子在接种前均匀地吸足水分，满足了种子萌动对水分的需求；三是震荡浸种还可以增加无菌水内的溶氧量，也有利于激发种子的萌动。由于上述原因，本发明产生了如下的有益效果：第一，芽苗生长快，传统的方法接种到成苗需30-45天甚至更长，而采用本方法仅需20天左右。第二，发芽整齐。现有技术培养的辣椒无菌苗，大小不一，而本发明的方法培养出的辣椒苗大小整齐一致；第三，本方法简单易行，操作方便，便于推广。简言之，本发明的有益效果是排毒充氧，促进种子萌动，促进芽苗生长，简单易行。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述。

实施例1： 用一种辣椒无菌苗培养技术培养9050辣椒无菌苗

1.自来水清洗：将100粒9050辣椒种子装在尼龙种子袋中，置于自来水下冲洗3-5分钟。

2.超净台消毒：将种子袋置于超净台内的组培空瓶内，喷洒75%酒精进行台面及空间消毒，开启紫外灯、打开无菌风开关，灭菌30min。

3.乙醇消毒：用75%酒精浸没组培瓶内种子袋，消毒1min。

4.氯化汞消毒：将种子转入0.1%氯化汞溶液中，消毒15min。

5.无菌水清洗：将种子转入无菌水中摇晃清洗30s。

6.无菌水浸种：将种子转入无菌水中，30℃振荡浸种24hr。

7.接种：将种子接种于仅含琼脂粉的培养基表面，25℃催芽。

通过以上步骤在25瓶中获得脱壳的无菌幼苗92株，出苗率达92%；培养历时20天，比现有的技术减少10-25天左右，且无菌苗生长整齐茁壮。

实施例2：用一种辣椒无菌苗培养技术培养7036辣椒无菌苗

1.自来水清洗：将120粒7036辣椒种子装在尼龙种子袋中，置于自来水下冲洗3-5分钟。