[发明专利]侦测核酸之方法

说明书

技术领域

本发明关于侦测核酸的方法与套组。

背景技术

聚合酶链反应(polymerase chain reaction；PCR)已发展数十年，广泛地运用在核酸分析。近年来，实时聚合酶链反应(real-time PCR)因为高灵敏度以及可定量分析的能力，而被大量地使用。实时PCR的定量结果系来自于侦测连接于目标DNA或RNA的荧光染料例如SYBR荧光(SYBR green(DreamTaq^TM))的荧光强度。然而，荧光的结果容易受到背景噪声的影响而误判，且荧光染料经时衰退，造成侦测上的限制。因此，有需要发展改善PCR反应的灵敏性与侦测限制的方法。

发明内容

本发明一实施形态提供一种侦测样本中至少一种核酸的方法，包括:提供磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子；使该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子与该样本反应；以及侦测来自该可侦测性纳米粒子的讯号以确认该样本中的每种核酸；其中，该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上，该可侦测性纳米粒子包含至少一种具有不同侦测讯号的纳米粒子，且连接于该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面的该寡核苷酸与该样本中的核酸一区域形成互补。

本发明另一实施形态提供一种侦测核酸的套组，包括含有磁性纳米粒子与可侦测性粒子的混合物，其中该磁性纳米粒子与该可侦测性纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上。

附图说明

第1图为显示本案一实施例之磁性纳米粒子及可侦测性纳米粒子与目标核酸在PCR循环中反应的示意图。

第2图为显示使用SYBR Green侦测进行实时PCR分析的目标DNA浓度与荧光强度关系的图。

第3图为显示本案一实施例中使用寡核苷酸连接的纳米粒子进行PCR分析法的目标DNA浓度与SERS讯号强度关系的图。

第4图为显示本案一实施例中对于10介摩尔(zeptomole)的目标DNA浓度，使用寡核苷酸连接的纳米粒子于PCR分析法的40个循环后，呈现的SERS讯号强度图。

【主要组件符号说明】

1~可侦测性纳米粒子

2~磁性纳米粒子

3,4~寡核苷酸

5~目标核酸

6~单股核酸

101,201,301,401,501,601~步骤

本发明之具体实施详细说明如下，然而以下的实施例仅用于进一步揭露本发明之技术内容，不应藉以限制本案的发明范畴。

具体实施方式

本案一实施形态提供使用纳米粒子为主的系统于核酸扩增反应，例如聚合酶链反应(PCR)或实时PCR，确认核酸的方法。以纳米粒子为主的系统包括磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子，此二种纳米粒子的表面分别具有寡核苷酸连接于其上。位于磁性纳米粒子表面的寡核苷酸与位于可侦测性纳米粒子表面的寡核苷酸彼此不互补(complementary)，因此在一般条件下，磁性纳米粒子与可侦测纳米粒子两者不会发生交互作用。位于磁性纳米粒子或任一种可侦测纳米粒子的表面的寡核苷酸被设计为与欲侦测的目标DNA的一区域互补，作用如核酸引子（primer），可与目标核酸杂交并以该目标核酸作为铸模(template)而延伸，形成与目标核酸互补的序列。位于磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子的表面的寡核苷酸以该目标核酸作为铸模而延伸后，延伸出的序列因为彼此互补而可杂交，使得磁性纳米粒子与可侦测性纳米粒子连结形成复合物。之后，可透过磁性捕捉技术等，收集此复合物，并且根据可侦测性纳米粒子发出的讯号以及核酸扩增反应的循环次数，以确认目标核酸。