[发明专利]表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体、其应用、构建方法及脱髓鞘疾病的治疗系统

权利要求书

1.一种用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体，其特征在于，包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子。

2.根据权利要求1所述的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体，其特征在于，所述病毒载体为腺病毒或慢病毒。

3.如权利要求1所述的用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体在制备用于治疗脱髓鞘疾病的药物中的应用。

4.一种用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

将少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子进行PCR扩增后插入到带有EYFP的质粒中，经验证蛋白表达正常且具有细胞特异性；

合成光敏感型腺苷酸环化酶基因序列，并将所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列插入到所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的下游，得到包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列后并将其插入到穿梭质粒中，得到携带包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒；

将携带包含所述少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子的光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒与病毒载体进行LR体外重组得到重组体，将所述重组体线性化后转染至293细胞中，包装所述重组体并进行扩增，3~5天后收集病毒，得到用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体。

5.一种脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，包括包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂、定位装置、注射装置和光刺激装置，其中，

所述用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体包括病毒载体和包装于所述病毒载体中的带有光敏感型腺苷酸环化酶基因序列的穿梭质粒，所述光敏感型腺苷酸环化酶基因序列包含少突胶质细胞和施万细胞的特异性启动子；

所述定位装置用于确定脱髓鞘部位；

所述注射装置用于将所述包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂注射入所述脱髓鞘部位；

所述光刺激装置用于对所述注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部位进行光刺激。

6.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂为浓度为10⁹~10¹¹/particles/mL的水溶性制剂。

7.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述定位装置选自放射性核素计算机断层扫描装置、磁共振成像装置、皮层电极装置、偶极子定位装置、磁共振波谱扫描装置、单光子发射计算机体层扫描装置及正电子发射体层扫描装置中的一种。

8.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述注射装置为微量注射泵或立体定位注射仪。

9.根据权利要求5所述的脱髓鞘疾病的治疗系统，其特征在于，所述光刺激装置用于发出波长为441纳米的蓝光对所述注射有包含用于表达光敏感型腺苷酸环化酶的重组载体的制剂的脱髓鞘部位进行光刺激，所述441纳米的蓝光以500ms为间隔进行闪烁。