[发明专利]一种耐贮猕猴桃新品种的选育方法

权利要求书

1.一种耐贮猕猴桃新品种的选育方法，其特征在于包含以下几个步骤：

（1）ACO基因的获得，从猕猴桃叶片中提取RNA，再将RNA反转录成cDNA，最后通过设计引物获得ACO基因；

（2）将ACO基因反向连接入双右边界双元载体，将载体转化入农杆菌中，通过叶盘转化法导入愈伤组织中，再通过筛选培养基获得抗性愈伤组织，经过分化培养基培养获得含有筛选标记再生苗；

（3）上游引物为Term F: 5′-GGT,GCT,TTC,CCA,GTC,CAA,ATC,GTT-3′，下游引物为Term R: 5′-CCA,GGT,TTA,GTC,GTC,TCG,TGT,CTG,GT-3′，进行PCR扩增，80－105℃预变性3－10min后运行下循环，94℃ 35 s，59℃ 35 s，72℃ 40 s，共35个循环，最后72℃ 10 min，25℃ 30 s，取PCR产物5－30 μL进行0.6%－1.5％琼脂糖凝胶电泳分离获得阳性植株；

（4）通过遗传分离获得无筛选标记的含有目的基因的植株，将同时含有hpt基因和aco基因的共转化植株转移至温室栽培，随机挑选其中10－50个T0代植株进行自交产生T1代后对T1代植株的基因组DNA进行PCR检测，从而获得无筛选标记的含有目的基因的植株。