[发明专利]重组蛋白

说明书

【发明所属的技术领域】

本发明涉及一种重组蛋白，且特别涉及一种具有较长半衰期的高糖基化红细胞生成素。

【背景技术】

红细胞生成素(Erythropoietin，简称EPO)是一种糖蛋白质激素，骨髓中血红细胞前驱的细胞因子。在人体中，可进行红细胞的制造、荷尔蒙的调节。同时，它也具有其他的生物功能，例如，当神经受到伤害时，红细胞生成激素也参与伤口愈合过程。

红细胞生成作用是指红细胞的生成，其作用为弥补被破坏的细胞。红细胞生成是一种受控制的生理机制，使足够的红细胞可被运用于适当的组织氧合作用。人类红细胞红细胞生成素(hEPO)由肾所产生，为一种体液血浆因子，可刺激红细胞的生成(Carnot，P  and Deflandre，C  (1906)C.R.Acad.Sci.143：432；Erslev，AJ(1953B 1ood 8：349；Reissmann，RR(1950)Blood 5：372；Jacobson，LO，Goldwasser，E，Freid，W and Plzak，LF(1957)Nature179：6331-4)。自然生成的EPO可刺激骨髓中红细胞前驱细胞的分裂及分化，并经由与红细胞前躯物受体的结合而展现其生物活性(Krantz，BS(1991)Blood 77：419)。

利用重组体DNA技术已可合成红细胞生成素(Egrie，JC，Strickland，TW，Lane，J et al.(1986)Immunobiol.72：213-224)，将经选殖的人类EPO基因嵌入，并以中国仓鼠卵巢组织细胞表达。EPO多肽在无糖情形下的分子量是18,236Pa。在完整的EPO分子中，分子量中约有40％为碳水化合物基团，其在蛋白质糖基化作用位置上将蛋白质糖基化(Sasaki，H，Bothner，B，Dell，A andFukuda，M(1987)J.Biol.Chem.262：12059)。

因红细胞生成素是形成红细胞所必要的，所以EPO可用来治疗红细胞低下或缺失的血液失调症。就临床而言，EPO可用于治疗慢性肾衰竭病人(CRF)(Eschbach，JW，Egri，JC，Downing，MR et al.(1987)NEJM 316：73-78；Eschbach，JW，Abdulhadi，MH，Browne，JK et al.(1989)Ann.Intern.Med.111：992；Egrie，JC，Eschbach，JW，McGuire，T，Adamson，JW(1988)Kidney Intl.33：262；Lim，VS，Degowin RL，Zavala，D et al.(1989)Ann.Intern.Med.110：108-114)、AIDS及接受化疗的癌症病人的贫血(Danna，RP，Rudnick，SA，Abels，RI In：MB，Garnick，ed.Erythropoietin in Clinical Applications-An International Perspective.New York，NY：Marcel Dekker；1990：p.301-324)。然而，目前EPO蛋白质治疗的生物利用率，受限于不良的血浆半衰期，以及蛋白酶的降解作用，使其难以获得良好的临床效力。

【发明内容】

本发明的目的为提供一种具有较长半衰期的高糖基化红细胞生成素。

为达上述目的，本发明另提供一种重组蛋白，包括：红细胞生成素；高糖基化片段；人类绒毛膜促性腺激素的羧基末端肽，以及促血小板生成素的羧基末端肽。

本发明更提供一种核苷酸序列，其编码上述重组蛋白。

本发明更提供一种细胞，其转染上述核苷酸序列以表达上述重组蛋白。

本发明更提供一种组合物，包括上述重组蛋白，以及药学上可接受的载体或佐剂。

为了让本发明的上述和其他目的、特征、和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附图示，作详细说明如下：

【具体实施方式】

本发明提供一种长效型红细胞生成素，及其制备与使用方法。

在一个实施方案中，本发明提供一种重组蛋白，其包括一红细胞生成素以及一高糖基化片段。

本发明所述的“红细胞生成素(EPO)”包括任何来源的EPO蛋白，特别是指人类或动物EPO。本发明的EPO不限于自然的EPO蛋白，也包括其衍生物、相似物、修饰物、突变物等，只要其具有自然EPO蛋白的活性即可。