[发明专利]鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定用引物体系

权利要求书

1.一种鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定用引物体系，其特征在于：由下列引物对组成：

（1）对鹿12S rRNA基因进行扩增生成鹿特异性扩增片段的引物对Ⅰ：

正向引物：5’-GCCTTCCTATTGACCCTTAATAG-3’

反向引物：5’-AGCGGCTGTAAAGTTACTTTCGT-3’；

（2）对猪12S rRNA基因进行扩增生成猪特异性扩增片段的引物对Ⅱ：

正向引物：5’-AGCACACCTATAACGGTAGCTCA-3’

反向引物：5’-CCTAGCTATCGTGTGTCAGGATT-3’；

（3）对牛Cytb基因进行扩增生成牛特异性扩增片段的引物对Ⅲ：

正向引物：5’-CCCTCTTACTAATTCTAGCTCT-3’

反向引物：5’-GTCCGATGGTGATATATGGGTG-3’；

（4）对羊Cytb基因进行扩增生成羊特异性扩增片段的引物对Ⅳ：

正向引物：5’-CGCCATGCTACTAATTCTTGTTCT-3’

反向引物：5’-TGGAGGAAGGGTACAAGTACTAAG-3’；

（5）对马基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对组合，该引物对组合由对马Cytb基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对Ⅴ和对马12S rRNA基因进行扩增生成马特异性扩增片段的引物对Ⅵ组成：

引物对Ⅴ：

正向引物：5’-CACAGCCCTGGTAGTCGTACA-3’

反向引物：5’-TGTCCGCCGATTCATGTTAGT-3’；

引物对Ⅵ：

正向引物：5’-CGTGTCAAAGACTAATACCAA-3’

反向引物：5’-AGCTATCGTGTAGTCAGAGGTA-3’；

（6）对驴16S rRNA基因进行扩增生成驴特异性扩增片段的引物对Ⅶ：

正向引物：5’-TTCAAGCTCAACGTCACACATA-3’

反向引物：5’-TGTGTTGGGTTAACAATAGTCT-3’；

（7）对兔12S rRNA基因进行扩增生成兔特异性扩增片段的引物对Ⅷ：

正向引物：5’-GCGTAAAGCGTGATTAGAATAAAC-3’

反向引物：5’-TAGCTATCGTGAGTTCGAAGAGT-3’；

（8）对鸡12S rRNA基因进行扩增生成鸡特异性扩增片段的引物对Ⅸ：

正向引物：5’-ATCCATCTTAGCCTCAACGATTAA-3’

反向引物：5’-CTATTGAGCTCACTGTTGTTCTTT-3’。

2.一种鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定方法，其特征在于：以样品总DNA为模板，利用所述引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、引物对Ⅲ、引物对Ⅳ、由引物对Ⅴ和引物对Ⅵ组成的引物对组合、引物对Ⅶ、引物对Ⅷ和引物对Ⅸ分别进行PCR扩增实验，反应结束后根据琼脂糖凝胶电泳判定结果；所述样品总DNA模板来自鹿、猪、牛、羊、马、驴、兔和鸡物种血液的混合，或上述各物种血液产品中的一种。

3.根据权利要求2所述的鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中的特定PCR反应体系包括下列组分：双蒸水3体积份、10×PCR反应缓冲液1体积份、2.5mM each的dNTPs 0.8体积份、2.5U/μl的Taq酶0.2体积份、经稀释500倍的总DNA模板1体积份、1μM正向引物2体积份和1μM反向引物2体积份。

4.根据权利要求3所述的鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中的特定PCR反应体系包括下列组分：双蒸水3μl、10×PCR反应缓冲液1μl、2.5mM each的dNTPs 0.8μl、2.5U/μl的Taq酶0.2μl、经稀释500倍的总DNA模板1μl、1μM正向引物2μl和1μM反向引物2μl。

5.根据权利要求2所述的鹿猪牛羊马驴兔鸡的PCR鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增实验中特定PCR反应程序为：依次进行94℃下预变性5min，94℃变性45s，56℃退火45s，72℃延伸45s，进行35次循环，72℃下延伸10min，最后在4℃下保持1min后结束。