[发明专利]一种用于检测轮状病毒的分子马达生物传感器试剂盒

说明书

技术领域

本发明是关于食源性病毒快速检测技术的一种。 

背景技术

轮状病毒是婴幼儿腹泻主要病原体。轮状病毒的经典病原检测方法包括电镜技术和分离培养。电镜技术要求每毫升样本中包含约10⁶个病毒颗粒，而且病毒颗粒易于降解，对正确诊断产生影响。分离培养检测技术的检测灵敏度较低，需要特殊培养条件，对轮状病毒的基础研究和临床诊断价值有限。以抗原检测为基础的检测方法特异性和灵敏度较低，而且不能有效地进行定量检测。PCR技术具有更高的灵敏度，不需细胞培养，但是检测费用高，且操作步骤繁琐，需要时间长。目前开发的轮状病毒检测方法中，提高检测方法的灵敏度、特异性，开发经济实用的试剂盒仍是轮状病毒检测技术的主要方向。发展快速、高效轮状病毒检测新的检测方法对有效预防轮状病毒疫情的暴发，鉴定轮状病毒的污染状况，评估环境卫生状况等将发挥重要作用。 

发明内容

以受控分子马达技术为核心，集成核酸探针识别、荧光探针标记与检测等技术，建立了一个全新概念的快速检测技术体系。利用ATP酶作为载体对目标物进行检测具有灵敏度高、特异性强、快速的特点。在F₀F₁-ATPase分子马达连接上特异的核酸探针，可以实现对特定食品微生物的快速、特异性、高通量的检测。本发明可将检测时间缩短至1～1.5h，且检测灵敏度能达到0.005ng/mL，满足现有的食源性病毒检测范围。 

附图说明

附图1为分子马达生物传感器模式图(其中a、b、c、α、β、δ、γ、ε均为ATP合酶亚基)，1为ε亚基抗体，2为链霉亲和素(Strptavidin)，3为N-biotin，4为VP7探针，5为轮状病毒单链RNA。 

附图2为chro VP7对不同种菌株的检测结果，纵坐标表示荧光值，横坐标表示检测的样本，其中1为水，2轮状病毒，3为甲肝病毒，4为诺如病毒。 

附图3为chro VP7对15个添加轮状病毒食品样本的检测结果，纵坐标表示荧光值，横坐标表示检测的样本，1～15为食品检测样本编号。 

具体实施方式

根据轮状病毒VP7基因设计特异性核酸探针5’-AGCACAACATTATAATCACAGTATAGTTTGGGTCGA-3’，其中探针的5’用生物素进行标记。将该探针通过生物素抗体连接在分子马达上面，利用分子马达生物传感器即可对待测样本的RNA进行检测，当样品为轮状病毒RNA时，检测体系的荧光值会发生明显的变化，通过这一变化即可判断样本为阳性。为此，我们设计了一个试剂盒，可以方便、快速对食源性轮状病毒进行检测。 

试剂盒组成：