[发明专利]一种鲤春病毒血症病毒RT-PCR检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种鲤春病毒血症病毒 RT-PCR检测试剂盒，其特征在于，包括以下成分：

该试剂盒包括以下成分：5×AMV 缓冲液，无镁Taq酶10×PCR 缓冲液，MgCl₂ ，dNTPs ，引物SVCVF和SVCVR，AMV酶，Taq酶；

SVCVF: 5’- ggaatccccatatttgttccatc - 3’；

SVCVR: 5’- tcacaagttgttttccattcagc - 3’。

2.利用权利要求1所述的一种鲤春病毒血症病毒 RT-PCR检测试剂盒检测鲤春病毒血症病毒的方法，其步骤是：

1）、病毒RNA的获取:

采用TRIzol^?或TRIzol^?LS试剂或柱吸附洗脱法提取样本总RNA；

2）、RT-PCR扩增:

采用25μl反应体系：在PCR管中加入步骤1）中获得的总RNA 5μL，5×AMV 缓冲液 1μL，无镁Taq酶10×PCR buffer 缓冲液 2μL，25mM MgCl₂ 1μL，25mM dNTPs 0.5μL，10μM引物SVCVF和SVCVR各0.5μL，AMV酶 0.5 μL，Taq酶0.5 μL，补加灭菌水至25μL；放入PCR仪进行RT-PCR反应，先45℃30 min，95℃3min，再按95℃ 20s -55℃ 20s -72℃ 20s作35个循环，最后72℃延伸5min，4℃下保温，同时设置阳性对照和阴性空白对照；

所述的引物SVCVF为SEQ ID NO.1所示，SVCVR为SEQ ID NO.2所示；

3）、检测结果判定，采用下述方式：

取扩增产物，用2% w/v的琼脂糖凝胶电泳后，置于凝胶成像系统中成像，电泳图片显示在210bp大小处有条带，则结果为阳性；如无任何条带，则结果为阴性。