[发明专利]位点特异性丝氨酸重组酶和它们的使用方法

说明书

本申请是申请日为2007年07月27日的申请号为200580047369.7标题为“位点特异性丝氨酸重组酶和它们的使用方法”的申请的分案申请。

关于联邦赞助研究的声明

本发明在政府的支持下进行，由美国国家标准与技术研究所（National Institute of Standards and Technology）的先进技术计划（Advance Technology Program）给予资助，资助金编号为70NANB1H3062。政府对本发明可以拥有某些权利。

发明领域

本发明涉及基因工程领域。具体而言，本发明涉及用于在细胞基因组中进行多核苷酸的位点特异性整合、删除、倒位、交换和易位的组合物和方法。本发明也涉及酶、多核苷酸、多肽和载体构建物。

发明背景

许多噬菌体和整合型质粒编码位点特异性重组系统，这使得能够将它们的基因组稳定地整合入它们宿主的基因组中，并将它们的基因组从宿主基因组切除。在这些系统中，对于重组反应的最小要求是重组酶和两个重组位点，其中重组酶催化重组事件(Sadowski(1986)J.Bacteriol.165:341-347；Sadowski(1993)FASEB J.7:760-767)。对于噬菌体整合系统而言，这些是指附着(att)位点，来自噬菌体DNA的attP元件以及在细菌基因组中存在的attB元件。这两个附着位点可能共有少至几个碱基对的序列同一性。重组酶蛋白与两个att位点结合，并催化DNA链的保守性和互换性交换，这导致环状噬菌体或质粒DNA整合入宿主DNA。也可能需要其他噬菌体或宿主因子，诸如DNA结合蛋白IHF、整合宿主因子，以获得有效率的反应(Friedman(1988)Cell 55:545-554;Finkel & Johnson(1992)Mol.Microbiol.6:3257-3265)。在噬菌体生长循环的裂解阶段，噬菌体整合酶，与其他宿主和/或噬菌体因子联合起来，也将噬菌体基因组从细菌基因组切割下来。已经开发出若干方法，从而使得能对哺乳动物基因组进行操作，以便阐明特定的感兴趣基因的相关性和功能。在这些方法中，转基因小鼠株和基因靶向技术的开发已经证明是特别有用的(Brandon,E.P.,Idzerda,R.L.and McKnight,G.S.(1995)Curr Biol,5,625-34;Brandon,E.P.,Idzerda,R.L.and McKnight,G.S.(1995)Curr Biol，5,758-65)。伴随着位点特异性重组酶的表征和应用，这些技术已经取得了新的进步(Kilby,N.J.,Snaith,M.R.and Murray,J.A.(1993)Trends Genet,9,413-21)。