[发明专利]用于多态性的高通量鉴定和检测的策略

权利要求书

1.具有3’-T突出端的接头在减少扩增的DNA样品的混合加标签、在减少或者防止DNA样品的DNA片段的串联体形成，和/或在鉴定核酸样品的多态性的方法中的用途。

2.权利要求1的用途，其中用于减少扩增的DNA中的混合加标签的方法包括下述步骤：

-提供DNA样品，

-用加标签的扩增引物扩增DNA样品来生成加标签的扩增子，

-任选地，提供3’-A突出端到加标签的扩增子的末端，

-将具有3’-T突出端的接头与加标签的扩增子连接。

3.权利要求1的用途，其中用于减少或者防止来自DNA样品的DNA片段的串联体形成的方法包括下述步骤：

-提供来自DNA样品的DNA片段，

-任选地，平滑化DNA片段来提供平末端的DNA片段，

-任选地，提供3’-A突出端到平末端的DNA片段的末端，

-连接接头到DNA片段，其中的接头在与片段连接端含有3’-T突出端。

4.权利要求2或3的用途，其中DNA样品是复杂度降低的DNA样品和/或DNA片段是复杂度降低的DNA片段。

5.权利要求3或4的用途，其中片段用（加标签的）扩增引物扩增而生成扩增子。

6.权利要求2-5中任一项的用途，其中接头连接的片段或扩增子在固相支持物上接受测序。

7.权利要求1的用途，其中用于鉴定核酸样品中的一种或多种多态性的方法包括下述步骤：

a)提供多个目的核酸样品，

b)对每个样品实施复杂度降低，提供核酸样品的多个文库，

c)将接头连接到文库中复杂度降低的核酸样品，使用的接头具有3’-T突出端，

d)对所述文库的至少一部分进行测序，

e)比对获自步骤d)的每个样品的序列，

f)测定步骤e)的多个核酸样品间的一个或多个多态性，

g)任选地，使用检测探针筛选目的检测样品核酸以鉴定在步骤f）中测定的一个或者多个多态性的存在、不存在或者量。

8.权利要求7的用途，其中检测核酸样品是获自步骤b）的复杂度降低的复杂度被降低的核酸样品。

9.权利要求7或8的用途，其中步骤b）进一步包括对文库加标签来获得经标签的文库的步骤。

10.权利要求9的用途，其中的标签由接头和/或引物提供。

11.权利要求10的用途，其中的标签是标识子序列。

12.权利要求10的用途，其中至少一个引物是被磷酸化的。

13.权利要求7的用途，其中测序包括在固相支持物上测序。

14.权利要求7-13中任一项的用途，其中通过将权利要求7的步骤g）设计的探针固定于阵列，之后通过在杂交条件下将包含探针的阵列与检测文库接触进行筛选。

15.用于筛选富集的微卫星文库的权利要求14的方法的用途，进行转录作谱cDNA-AFLP(数字化Northern),复杂基因的测序,表达序列标签文库测序(对完整的cDNA或cDNA-AFLP),危微小RNA发现(小的插入文库的测序),细菌人造染色体(重叠群)测序,批量分离分析法与AFLP/cDNA-AFLP组合,AFLP片段的常规检测(标记辅助回交)。