[发明专利]一种小叶丁素的提纯方法

说明书

技术领域

本发明属于植物提取技术领域，涉及一种从小叶香茶菜干燥叶中提取纯化小叶丁素的方法。

背景技术

小叶香茶菜Isodon parvifolia (Batalin)Hara系唇形科香茶菜属植物，主要分布于我国四川省。1990年郭跃伟等首次从小叶香茶菜的叶中分离得到小叶丁素，并经过初步药理研究表明，小叶丁素对人肝癌细胞株QGY-7703有一定抑制作用。郭跃伟等采用的方法是用95%乙醇提取，用生药量2%的活性炭脱色，常法处理得醇浸膏，乙酸乙酯萃取多次，回收，硅胶柱分离，氯仿-丙酮梯度洗脱分离得到小叶丁素。该方法样品损失较大、得率低、成本高。

小叶丁素（Parvifolinoic acid），分子式为C₄₂H₇₆O₃，分子量为629.07，为白色粉末状，mp.90-91.5℃。

发明内容

本发明的目的是提供一种小叶丁素的提纯方法，该方法提率高、成本低，适合规模化生产。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种小叶丁素的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）酶解：取原料小叶香茶菜干燥叶，经粉碎处理，用酶溶液浸泡，水浴酶解2-5小时，并充分搅拌；

（2）提取：将上述酶解液过滤，取滤渣用5-6倍药材重量的乙醇水溶液提取2-3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏；

（3）富集：将浸膏过大孔吸附树脂柱，醇水洗脱，收集洗脱液；

（4）纯化：将上述洗脱液减压回收乙醇，用氯仿萃取，萃取液浓缩后上硅胶柱（硅胶粒度为100-200目），乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集小叶丁素流分，减压浓缩，冷冻干燥得产品。

步骤（1）中所述酶选自纤维素酶、蜗牛酶、葡聚糖酶或果胶酶中的一种，酶用量为1.8-3.5‰，pH为3.8-4.6，酶解温度为40-50℃。

步骤（2）中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分比浓度为80-90%。

步骤（3）中所述大孔树脂选自AB-8、XAD-16、XDA-8或HZ806型中的一种。

步骤（3）中所述醇水洗脱为3-4BV10%-20%乙醇水溶液→4-6BV70%-90%乙醇水溶液，乙醇溶液浓度均为体积百分比浓度。

步骤（4）中所述梯度洗脱为乙酸乙酯-乙醇按体积比由高到低，依次为10:1、5:1、3:1。

本发明采用酶解提取，有效成分更容易溶出，提高了提取率；采用大孔树脂分离，不同浓度乙醇洗脱，除去杂质；使用硅胶柱，乙酸乙酯-乙醇梯度柱层析，可得到较纯净的小叶丁素，产品纯度较高。

具体实施方式：

实施例1：

取小叶香茶菜干燥叶粉碎过60目筛，称取5kg，加15LpH4.2的纤维素酶水溶液（每公斤生药加入2.2g纤维素酶）进行浸泡半小时，然后在42℃下水浴酶解3小时，并充分搅拌，过滤，取滤渣用5倍药材重量的80%乙醇加热回流提取1小时，提取3次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入XAD-16大孔吸附树脂柱，先取3BV10%乙醇洗脱杂质，再取4BV70%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇得粗提物，用等倍体积量的氯仿萃取，连续萃取4次，合并萃取液，萃取液浓缩后上硅胶柱层析（硅胶粒度为100-200目），用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集小叶丁素流分，减压浓缩，冷冻干燥得0.67g小叶丁素，含量92.6%。

实施例2：

取小叶香茶菜干燥叶粉碎过60目筛，称取5kg，加15LpH4.2的纤维素酶水溶液（每公斤生药加入3.1g纤维素酶）进行浸泡半小时，然后在44℃下水浴酶解2小时，并充分搅拌，过滤，取滤渣用6倍药材重量的90%乙醇加热回流提取1小时，提取2次，合并提取液，减压浓缩得浸膏，将浸膏加热水分散，加入AB-8大孔吸附树脂柱，先取4BV20%乙醇洗脱杂质，再取4BV90%乙醇洗脱有效成分，减压回收乙醇得粗提物，用等倍体积量的氯仿萃取，连续萃取4次，合并萃取液，萃取液浓缩后上硅胶柱层析（硅胶粒度为100-200目），用乙酸乙酯-乙醇按10:1、5:1、3:1梯度洗脱，TLC跟踪监测，收集小叶丁素流分，减压浓缩，冷冻干燥得0.63g小叶丁素，含量94.8%。

实施例3：