[发明专利]一种制备鹧鸪花物B的方法

说明书

技术领域

本发明属于中药化学技术领域，涉及一种制备鹧鸪花物B的方法。

背景技术

鹧鸪花物B是从楝科（Meliaceae）植物罗卡鹧鸪花Trichilia roka Chiov.的茎皮中分离得到的一种三萜类化合物，呈白色无定形固体状。分子式为C₃₅H₄₄O₁₄，分子量为688.72，目前对鹧鸪花物B的研究较少，1984年学者通过药理实验发现鹧鸪花物B具有昆虫拒食活性，在200ppm时对日本疫病昆虫根切虫的幼虫有拒食活性；另外还发现鹧鸪花物B对DNA修复缺损酵母株RS322K（rad 52Y）有中等抑制作用，其IC₅₀为13μg/ml。

目前，尚无大量制备鹧鸪花物B的工业化方法报道和专利公开。

发明内容

本发明的目的在于提供一种制备鹧鸪花物B的方法。

本发明提供的从罗卡鹧鸪花茎皮中提取制备鹧鸪花物B的方法步骤如下：

（1）将罗卡鹧鸪花茎皮粉碎，用乙醇水溶液渗漉提取，将提取液减压浓缩得到浸膏；

（2）将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液溶解，过滤，乙酸乙酯和水的体积比为10:1，滤液静置分层15-28h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物；

（3）将乙酸乙酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液溶解，过滤，庚烷和甲醇的体积比为2:1，滤液静置分层5-8h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物；

（4）甲醇萃取物通过硅胶柱层析，以石油醚-乙酸乙酯为洗脱剂进行梯度洗脱，将含有鹧鸪花物B的流分通过葡聚糖凝胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇体积比为4:1的混合溶液进一步洗脱纯化，得到鹧鸪花物B。

步骤（1）中所述乙醇水溶液为体积百分比为60-85%的乙醇水溶液，其用量是所用药材重量的5-15倍，药材的浸泡时间为2-8小时，渗漉提取时间为2-5小时。

步骤（4）中所述石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱是按石油醚-乙酸乙酯体积比5:1、3:1、1:1、1:2进行梯度洗脱。

本发明的特点在于：通过乙酸乙酯-水和庚烷-甲醇体系的分配，可提高鹧鸪花物B的萃取率；经硅胶柱和葡聚糖凝胶柱层析，可得到高纯度的鹧鸪花物B，本发明的鹧鸪花物B的制备方法，具有提取工艺简单，成本低、提率高，制备得到的鹧鸪花物B单体纯度高等特点，适用于工业化生产。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步阐述，但本发明不限于此。

实施例1：

将50kg干燥的罗卡鹧鸪花茎皮粉碎成粗粉，先用少量60%乙醇浸泡4小时，再用原料重量5倍的60%乙醇水溶液渗漉提取，提取时间为4小时，收集渗漉液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液（乙酸乙酯和水的体积比为10:1）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层15h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液（庚烷和甲醇的体积比为2:1）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层8h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取物通过硅胶柱层析（甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:3），按石油醚-乙酸乙酯体积比5:1、3:1、1:1、1:2进行梯度洗脱，每个梯度用量为600ml，收集含鹧鸪花物B的流分通过葡聚糖凝胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇体积比为4:1的混合溶液进一步洗脱纯化，洗脱液减压浓缩干燥得到鹧鸪花物B119mg，纯度为90.8%。

实施例2：

将50kg干燥的罗卡鹧鸪花茎皮粉碎成粗粉，先用少量80%乙醇浸泡2小时，再用原料重量8倍的80%乙醇水溶液渗漉提取，提取时间为2小时，收集渗漉液浓缩得到浸膏。将浸膏用乙酸乙酯和水的混合溶液（乙酸乙酯和水的体积比为10:1）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层28h，分液，取上相，减压浓缩蒸干得到乙酸乙酯萃取物。将乙酸乙酯萃取物用庚烷和甲醇的混合溶液（庚烷和甲醇的体积比为2:1）搅拌溶解，过滤，滤液静置分层6h，分液，取下相，减压浓缩蒸干得到甲醇萃取物。将甲醇萃取物通过硅胶柱层析（甲醇萃取物与硅胶用量之比为1:3），按石油醚-乙酸乙酯体积比5:1、3:1、1:1、1:2进行梯度洗脱，每个梯度用量为600ml，收集含鹧鸪花物B的流分通过葡聚糖凝胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇体积比为4:1的混合溶液进一步洗脱纯化，洗脱液减压浓缩干燥得到鹧鸪花物B103mg，纯度为93.6%。

实施例3：