[发明专利]一种预防及治疗瘢痕的疫苗及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种疫苗，特别是一种预防及治疗瘢痕的疫苗及制备方法，属于医药领域。 

背景技术

白细胞介素10（IL-10）是多种细胞产生的重要免疫调节细胞因子，具有广泛的生物学活性，包括免疫抑制、抗炎及免疫调节特性，主要生物学功能是限制和终止炎症反应，调节多种免疫细胞的分化和增殖。体内外和动物实验表明IL-10在炎症、恶变和自身免疫性疾病方面都发挥了重要功能。在临床上应用于治疗急、慢性炎症疾病、自身免疫性疾病如炎性肠炎、类风湿性关节炎、克隆病、多发性硬化症、银屑病等。 

IL-10作为一种炎症反应调节抑制因子，具有：①调整炎症细胞的募集和分化，减少前炎症细胞因子的分泌；②减少胞外基质（ECM）的产生，上调蛋白水解酶（如基质金属酶）增加ECM的降解；③下调TGF-β1的活性及表达，拮抗瘢痕增生的作用。Renovo公司利用重组hIL-10作为治疗瘢痕增生，改善瘢痕外观的候选药物已进入III期临床研究，但存在着缺乏对病理部位的特异性、用药次数多、时间长及纯化工艺繁杂等缺点。 

胶原蛋白过度沉积是瘢痕组织的重要特征，而CBD多肽（TKKTLRT，7肽）是能够特异结合胶原蛋白的多肽序列。将编码人hIL-10基因、CBD基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)在基因水平融合，构建了预防和治疗瘢痕的核酸疫苗。经Balb/C小鼠伤口愈合模型试验证实，该疫苗在一定时间内能够诱导小鼠合成分泌 hIL-10-CBD，分泌的hIL-10-CBD蛋白能够与伤口愈合过程中细胞产生的胶原蛋白特异结合，既可以降低疫苗量及治疗成本，又能够在瘢痕部位有效地发挥药理作用，从而达到预防及治疗瘢痕的形成，改善瘢痕外观的疗效。 

发明内容

本发明的目的是提供一种预防及治疗瘢痕的疫苗及制备方法，该疫苗是一种核酸疫苗，是由编码人白细胞介素10（human interlenkin 10,hIL-10）基因、胶原特异结合的多肽CBD基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)在基因水平融合后构成。经Balb/C小鼠伤口愈合模型试验证实，该疫苗在一定时间内能够诱导小鼠合成分泌hIL-10-CBD，分泌的hIL-10-CBD蛋白能够与伤口愈合过程中细胞产生的胶原蛋白特异结合，从而阻止了胞外基质的过度沉积而造成的纤维化。该疫苗用于预防及治疗瘢痕的形成，改善瘢痕的外观的作用。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：一种预防及治疗瘢痕的疫苗，其特征是：它是由编码人白细胞介素10基因、胶原特异结合的多肽CBD基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)在基因水平融合后构成，其中，编码人白细胞介素10基因简称hIL-10基因；融合后的hIL-10-CBD重组基因的核酸序列No1： 

5’atgcacagctcagcactgctctgttgcctggtcctcctgactggggtgagggccagcccaggccagggcacccagtctgagaacagctgcacccacttcccaggcaacctgcctaacatgcttcgagatctccgagatgccttcagcagagtgaagactttctttcaaatgaaggatcagctggacaacttgttgttaaaggagtccttgctggaggactttaagggttacctgggttgccaagccttgtctgagatgatccagttttacctggaggaggtgatgccccaagctgagaaccaagacccagacatcaaggcgcatgtgaactccctgggggagaacctgaagaccctcaggctgaggctacggcgctgtcatcgatttcttccctgtgaaaacaagagcaaggccgtggagcaggtgaagaatgcctttaataagctccaagagaaaggcatctacaaagccatgagtgagtttgacatcttcatcaactacatagaagcctacatgacaatgaagatacgaaacggtggtggtggttctaccaagaagac c ctccgcacc3’，其中3’，5’分别代表重组核酸链的3’，5’端。 

所述的hIL-10基因，其相应的核酸序列No2：