[发明专利]一种基于羊传染性脓疱病毒B2L基因的DNA疫苗载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种基于羊传染性脓疱病毒B2L基因的DNA疫苗载体，其特征在于所述的疫苗载体是通过将羊传染性脓疱病毒主要免疫原性基因B2L基因插入到真核表达载体pVAX1内构建得到的。

2.如权利要求1所述的DNA疫苗载体，其特征在于所述的B2L基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.一种宿主细胞，其特征在于含有权利要求1或2所述的DNA疫苗载体。

4.如权利要求3所述的宿主细胞，其特征在于其为大肠杆菌DH5α。

5.一种构建权利要求1或2所述的DNA疫苗载体的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）根据B2L基因完整编码区设计一对引物，上下游引物P1和P2分别引入BamH Ⅰ（GGATCC）和Xho Ⅰ（CTCGAG）酶切位点，所述的引物序列如下所示：

上游引物P1：TTTGGATCCATGTGGCCGTTCTCCTC

下游引物P2：TTTCTCGAGTTAATTTATTGGTTTGC

（2）用引物P1，P2，在高保真DNA聚合酶作用下，以羊传染性脓疱病毒DNA为模板，扩增B2L基因，电泳检测并纯化回收该片段；

（3）将步骤（2）得到的片段与pVAX1载体分别用限制性内切酶BamH Ⅰ和Xho Ⅰ进行酶切，分别获得带有粘性末端的B2L基因片段和PVAX1质粒片段；

（4）将步骤（3）得到的两段片段连接，连接产物转化大肠杆菌DH5α，鉴定正确后，通过小量提取或大量提取制备得到所述的DNA疫苗载体。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于步骤（2）中的扩增条件为95℃预变性5min后进入循环，循环参数为95℃ 1min、57.5℃ 1min、72℃ 1min，35个循环后72℃延伸10min。

7.如权利要求5所述的方法，其特征在于扩增得到的B2L基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

8.权利要求1或2所述的DNA疫苗载体在制备预防羊传染性脓疱疾病药物中的应用。

9.一种用于预防羊传染性脓疱的DNA疫苗，其特征在于含有权利要求1或2所述的DNA疫苗载体。