[发明专利]一种从楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物分离领域，特别是涉及一种从楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法。

背景技术

楝Melia azedarach L.系楝科楝属植物，其药用部位为干燥树皮及根皮，又名苦楝，常作为驱虫药被收入中国药典，且楝在我国分布较广，资源丰富。近年来，国内外有大量的楝科楝属植物的研究报道，证实楝属植物提取物具有杀虫、抑菌、抗病毒、抗肿瘤 、康生于等多种药理活性，楝属植物作为植物源农药，具有对有害植物高效、对非靶标生物安全、易分解、不污染环境和不破坏生态平衡等优点。从楝的根皮中分离出的三唇素B（Trichilin B）、三唇素D(（Trichilin D）)及三唇素H（Trichilin H）属于柠檬苦素类化合物，均对有害昆虫甜菜夜蛾的幼虫有一定的拒食作用。

目前，国内尚未见三唇素B、三唇素D和三唇素H的提取纯化方法方面的专利和文献报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从楝中提取三唇素B、三唇素D和三唇素H的方法，为百子莲皂苷A的制备提供一种简便易行的方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案来实现的：

1）将楝的根皮粉碎，用体积百分比浓度为60-75%的乙醇水溶液微波提取2次，每次0.2-0.5h，过滤得到提取液；

2）将步骤1）所得提取液减压回收除去乙醇，得到浓缩液，先用石油醚萃取，萃取液再用二氯甲烷萃取，各萃取3-5次，每次用量均为浓缩液体积量的2-4倍，将二氯甲烷萃取液浓缩得到浸膏；

3）将步骤2）所得浸膏用甲醇溶解干法拌样后进行常压柱层析，层析柱填料为中性氧化铝，粒度为100-200目，梯度洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，按体积比由高到低，依次按20:1-1:1进行洗脱，分段收集半成品；

4）将步骤3）所得半成品合并，加入甲醇溶解，再经制备高效液相色谱分离得到三唇素B、三唇素D和三唇素H流分；

5）将步骤4）所得三种流分分别采用两相溶剂结晶法进一步纯化，得到纯度达98.5%以上的产品。

所述步骤1）中乙醇溶液的用量为原料的8-12倍（V/W），微波功率为500-700W。

所述步骤4）中色谱条件为：检测波长212nm，流动相为乙腈-水，其中乙腈的体积百分比为38-55%。

所述步骤5）中两相溶剂为石油醚-乙酸乙酯，体积比为4:1。

本工艺采用微波提取，生产周期短，且提取均匀、快速、能耗低；采用氧化铝柱分离，石油醚-乙酸乙酯混合溶剂洗脱，操作简单易于放大生产，制备液相色谱分离，产品纯度高，制备量大。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

实施例1：

取楝的根皮粉碎，称量20kg，加11倍量的70%乙醇溶液微波提取2次，每次15min，微波功率为500W，过滤得到提取液，减压回收乙醇，得到浓缩液，先用15L石油醚萃取，萃余液再用30L二氯甲烷萃取，各萃取3次，二氯甲烷萃取液合并浓缩，得到浸膏。将所得浸膏用甲醇溶解干法混合拌样后进行常压柱层析，层析柱填料为中性氧化铝（100-200目），梯度洗脱，洗脱剂为石油醚-乙酸乙酯，由高到低，依次按体积比20:1-1:1进行洗脱，分段收集半成品。将分段收集的半成品合并后，加入甲醇完全溶解，再经制备高效液相色谱分离，检测波长为212nm，流动相为乙腈-水（乙腈体积百分比浓度为45%），得到含量分别达89.3%、90.1%和88.7%的三唇素B、三唇素D和三唇素H。再将所得三种流分采用两相溶剂结晶法进一步纯化，结晶溶剂为石油醚-乙酸乙酯，体积比为4:1，得到纯度达98.5%以上的产品，即三唇素B、三唇素D和三唇素H。

实施例2：