[发明专利]转基因同时提高丹参中迷迭香酸和丹酚酸B含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于药用植物基因工程技术领域，具体涉及到在丹参中组合共转化金鱼草Rosea1基因和金鱼草Delila基因同时提高丹参中酚酸类成分迷迭香酸和丹酚酸B含量的方法。

背景技术

丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）为唇形科（Labiatae）鼠尾草属多年生草本植物，以其根及根茎入药，为我国常用大宗药材之一。丹参的主要活性成分为脂溶性的丹参酮类和水溶性的酚酸类，具有活血化瘀，通经止痛，清心除烦等功效，在临床上被广泛用于心脑血管疾病、癌症以及各种炎症的治疗。伴随着丹参原药材需求量的日益扩大和规范化种植的需求，培育活性成分含量高的优良丹参新品种已成为丹参原药材生产中亟待解决的关键问题之一。基于传统中药多用其水煎剂的用药方式，以迷迭香酸和丹酚酸B为代表的水溶性酚酸类成分被普遍认为是丹参发挥药效的主要活性物质基础，更是受到研究者的普遍关注。丹参水溶性酚酸类成分主要表现为抗氧化作用，迷迭香酸作为抗炎镇痛药已于1990年在德国投放市场；丹参素和原儿茶醛是丹参治疗冠心病的主要有效成分；丹酚酸B是目前已知抗氧化作用最强的天然产物之一，也是丹参中含量最高、抗氧化活性最强的化合物，为2010年版《中华人民共和国药典》规定的丹参药材质量控制的水溶性指标性成分之一，对心、脑、肝、肾、胃等多个器官具有保护作用。

随着丹参有效成分及其药理活性的深入研究，近年来以丹参为主要原料的药品、制剂、化妆品和系列保健产品层出不穷，丹参资源供不应求。伴随着丹参药材需求的日益扩大和野生资源的逐渐减少，人工种植面积逐年增大。然而作为常异交植物，丹参种内变异较大，性状复杂。栽培丹参只种不选的状况使得各产地丹参质量参差不齐，品种退化严重，有效成分含量不稳定，成为丹参作为高品质植物药大规模进军国际市场的最大障碍之一。另外，由于人工栽培条件下药田生态环境中生物多样性差、丰富度低，导致丹参病虫害优势种群突出、病虫害频发，严重影响了药材的产量和质量。上述问题成为中药丹参药材产业发展的瓶颈。由于丹参野生资源几乎耗尽，目前药用丹参以人工栽培为主，而栽培中人们对丹参优良品种的选育重视不够，导致丹参质量良莠差异较大。因此，提高丹参中有效成分，尤其是迷迭香酸和丹酚酸B的含量，培育优异的丹参资源具有重要意义。

为了提高品质、满足市场需求，近年来利用基因工程、细胞工程等现代生物技术手段对丹参进行改良以提高其药材有效成分的含量愈来愈受到人们的重视。在诸多方法之中，利用基因工程技术对药用植物次生代谢途径的遗传特性进行改造，提高药用植物有效成分含量，培育能够大量积累目标次生代谢物的新品种，愈来愈受到人们的关注。以转基因技术为核心的现代分子育种技术在改良药用植物、丰富中药资源、提高抗病性和抗逆性、培养高天然药物含量的新型转基因药材中有着诱人的应用前景。但目前利用转基因技术提高丹参中丹参酚酸类成分的含量，特别是迷迭香酸和丹酚酸B含量的方法尚无报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于克服上述技术的不足，提供一种转基因同时提高丹参中迷迭香酸和丹酚酸B含量的方法。

解决上述技术问题所采用的技术方案是它包括下述步骤：

1、金鱼草Rosea1基因和金鱼草Delila基因的克隆