[发明专利]重组鲫鱼MBSP表达菌株及其构建方法有效
| 申请号： | 201210333208.6 | 申请日： | 2012-09-11 |
| 公开（公告）号： | CN102827784A | 公开（公告）日： | 2012-12-19 |
| 发明（设计）人： | 杜翠红;曹敏杰;韩龙 | 申请（专利权）人： | 集美大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/57;C12N15/81;C12R1/84 |
| 代理公司： | 厦门市新华专利商标代理有限公司 35203 | 代理人： | 朱凌 |
| 地址： | 361021 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 鲫鱼 mbsp 表达 菌株 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组鲫鱼MBSP表达菌株，其特征在于：所述表达菌株以巴斯德毕赤酵母GS115为宿主菌，并含有重组酵母表达载体pPIC9K- MBSP；且该重组酵母表达载体pPIC9K- MBSP通过将鲫鱼MBSP基因插入酵母表达载体pPIC9K中构建。
2.一种如权利要求1所述重组鲫鱼MBSP表达菌株的构建方法，其特征在于：包括如下步骤：根据编码鲫鱼MBSP的cDNA序列设计合成一对特异性引物SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3，以鲫鱼肌肉细胞中的总RNA为模板，通过RT-PCR方法扩增鲫鱼MBSP基因片段，将PCR产物和载体pPIC9K分别用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ进行双酶切后，用DNA连接酶连接，将鲫鱼MBSP基因片段定向插入到pPIC9K载体的限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ之间，获得的连接产物即为重组酵母表达载体pPIC9K- MBSP，接着将重组酵母表达载体pPIC9K- MBSP用SalⅠ内切酶线性化后，转化巴斯德毕赤酵母GS115的感受态细胞，用含G418的YPD抗性平板筛选高拷贝的阳性转化子，获得重组鲫鱼MBSP表达菌株。
3.如权利要求2所述的一种重组鲫鱼MBSP表达菌株的构建方法，其特征在于：利用甲醇诱导所构建的重组鲫鱼MBSP表达菌株。
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