[发明专利]测定铁‐碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法的应用

说明书

分案说明 

本申请是申请号为200910232202.8，申请日为2009.12.09，名称为“一种测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法”的中国发明专利申请的分案申请。 

技术领域

本发明属于大分子分析测定领域，涉及测定铁-碳水化合物络合物浊点和游离糖缓冲系数的方法的应用。 

背景技术

铁是人体必须的微量元素，由于摄入不足、利用受限或其他原因引起的铁缺乏相当普遍，缺铁性贫血是当今世界上分布最广的营养缺乏病。铁－碳水化合物络合物是目前广泛应用的抗缺铁性贫血的补铁剂，特别是应用于肾脏疾病血液透析所导致的缺铁性贫血，具有快速高效、定位准确、危险性低的优点。 

铁－碳水化合物络合物是由碳氢化合物和多核氢氧化铁胶体络合得到的。其中，铁核处于核心位置，碳水化合物处于分子外层，呈一种同心球状结构。而不同品种铁－碳水化合物络合物之间的主要差别在于碳水化合物的种类不同或分子量不同。例如，蔗糖铁是由氢氧化铁胶体和蔗糖络合制备的一种水溶性氢氧化铁蔗糖复合物，其包含的铁处于非离子状态。在分子中氢氧化铁胶体组成多核铁母核，而蔗糖通过其活泼羟基取代铁母核表面的水分子与之结合，二者的结合力为非共价键分子间力。在蔗糖铁中，蔗糖作为氢氧化铁胶体的增溶剂存在，蔗糖与氢氧化铁胶体存在一个动态的平衡。这种多核的氢氧化铁核心被大量非共价键的蔗糖分子浅浅的包绕，从而形成一个大约43Kda的大分子复合物。该多核心的铁复合物结构上类似于天然存在的铁蛋白，具有合适的稳定性，既可保证在生理状态下没有离子铁释放，又能够很好的适应生理性铁的吸收利用。 

研究人员曾对铁－碳水化合物络合物的安全性评价做了一些有益的尝试。Dr.Nissim在《Preparation and Standardisation of Saccharated Iron Oxide for Intravenous Adminstration》The Lancet.April 23,1949.(686-689)一文中，曾经对蔗糖铁复合物安全性（用急毒实验中实验动物存活率来定量评估）和其浊点进行关联，发现二者具有相关关系：使用相同剂量下，随着浊点的下降，实验动物存活率上升，并呈现一定的半对数线性关系。研究表明：蔗糖铁复合物浊点能够指示蔗糖铁安全性的高低，这显然和蔗糖铁复合物在动物体内生理环境下的稳定程度相关。但是，遗憾的是Dr.Nissim并没有对浊点的物理意义和测定方法进行深入的研究。文献中，Dr.Nissim并没有给出严格的浊点定义，而且其测定方法是通过滴加盐酸和目测溶液浑浊度变化的方法来实现的。作者并没有提及并详细研究蔗糖铁酸降解动力学以及其和浊点之间的关系，更没有就蔗糖铁酸降解动力学和蔗糖铁安全性建立明确的关联关系。 

多年来，这一领域的研究处于停滞状态，仅有的研究局限于浊点测定方法中观察条件的界定和优化。例如：美国药典对蔗糖铁注射液的浊点做了规定，其控制范围为4.4-5.3。但是，同样遗憾的是：虽然美国药典中测定蔗糖铁注射液浊点的方法较Dr.Nissim有所进步，但是仍然没有摆脱目测浑浊度确定浊点的方法。美国药典测试方法可以这样表述：配制一定浓度的蔗糖铁溶液于透明容器中，在暗室中使平行光线通过容器中的蔗糖铁溶液，并在持续搅拌下缓慢滴加盐酸溶液，至光路中溶液开始出现持续混浊，记录pH值，记为浊点。这样的方法同样全靠人眼观察判别，主观性较强，容易受操作者条件，测试环境，所使用光源的强弱等的影响，往往同一个样品不同的人检测，得出的检测结果不同；即使是同一测试人，在不同的测试条件下，其测试结果也不同。多年来，这种方法一直延续使用而没有被改进，在新版美国药典（USP32）中，仍然采用上述方法测定蔗糖铁注射液的浊点。 

选用浊度仪直接测定蔗糖铁溶液的浊度，通过测定指定浊度值的蔗糖铁溶液pH来确定其浊点，是解决目测法测定浊点主观性太强的有益尝试。但是，根据蔗糖铁溶液浊点的定义，在浊点pH下，其溶液浊度是很低的。而较低浊度的准确测量，对浊度仪的精度会有很高的要求，并不是一般的浊度仪能够满足的。另外，无法避免的是测试溶液往往存在不稳定的本底浊度，会干扰浊度仪的测定；所以，即使精度很高的浊度仪也无法测得测试溶液的真实浊度和浊度的变化，也很难测定相应的浊点。所以，目前尚无法看到使用这种方法测定蔗糖铁浊点的报道。 

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中测定铁－碳水化合物络合物的浊点主观性较强，容易受操 作者条件和测试环境影响，以及浊度分析设备在较低量程下的测试值误差较大的缺陷，提供一种利用仪器测定浊度与数据拟合相结合准确测定浊度和游离糖缓冲系数的方法。