[发明专利]一种利用树干毕赤酵母固定化细胞发酵乙醇的方法

权利要求书

1.一种利用树干毕赤酵母固定化细胞发酵乙醇的方法，其特征在于发酵时，将固定化凝胶球用无菌水洗3次后，移入发酵培养基中；发酵容器为250 mL三角瓶，发酵液体积与凝胶球的堆积体积之比为3:2，其中发酵液体积为50 mL，总体积为80 mL；将三角瓶置于恒温振荡器中，在35℃ 、150 r/min条件下进行乙醇发酵。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，固定化细胞的制备与增殖方法为：将试管斜面菌种接入液体酵母细胞培养基，在30℃ 、150 r/min条件下活化2 d，取2 mL菌液与68 mL海藻酸钠溶液于常温下混合，注入2% CaCl₂水溶液中，固化4 h，用无菌水将固化后的直径2～3 mm海藻酸钙凝胶球洗3次,每次50 mL，移入1.2% MnSO₄溶液中，放置4℃冰箱固化24 h；将固定化好的直经3 mm凝胶球置于增殖培养基中，在30℃、150 r/min条件下增殖培养，12 h更换一次新鲜培养液，共增殖4次。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，发酵培养基为葡萄糖30.0 g/L，木糖30.0 g/L，CaC1₂ 2.5 g/L，MgSO₄ 0.25 g/L，KH₂PO₄ 2.5 g/L，培养基pH 5．0。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，固定化增殖培养基为：葡萄糖30.0 g/L，木糖30.0 g/L，蛋白胨3.0 g/L，酵母汁2.5 g/L，CaC1₂ 2.5 g/L，MgSO₄

0.25 g/L，KH₂PO₄ 2.5 g/L，培养基pH 5.0。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，酵母细胞培养基为:木糖20.0 g/L，蛋白胨5.0 g/L，酵母汁3.0 g/L，培养基pH 5.0。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，海藻酸锰、海藻酸铝的固定化细胞耐磷酸盐能力提高3倍。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当MnSO₄溶液质量分数为1.3%时，形成的海藻酸锰固定化酵母进行乙醇发酵。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，当pH 为5.5时海藻酸锰固定化细胞乙醇发酵。