[发明专利]猪乙脑疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药领域，具体地，本发明涉及猪乙脑疫苗及其制备方法。

背景技术

乙型脑炎简称乙脑，是由乙型脑炎病毒引起的一种人畜共患传染病。本病最早发现于日本，所以又称日本乙型脑炎。乙脑是人畜共患的自然疫源性疾病，人与许多动物都可以成为本病的传染源，乙脑是严重威胁人类和动物健康的传染性疾病，对畜牧业造成严重的危害。在动物中，猪是主要的乙脑病毒的主要宿主，乙脑病毒必须依靠吸血雌蚊作媒介进行传播，流行环节是猪-蚊-猪。自然环境中，猪的感染率很高，仔猪经过一个流行季以后几乎100%感染。猪感染乙脑后多出现高热，精神沉郁或有神经症状，食欲减退，有的出现麻痹症状。

由于乙型脑炎是由蚊子叮咬而引起的，我们无法完全消灭蚊子也无法阻止猪只不被蚊子咬，因此，注射疫苗成为预防乙型脑炎的首选。然而，目前的乙脑疫苗制备方法效率低，制备的乙脑疫苗病毒含量低、免疫效力低、免疫效果不稳定。

因此，目前制备乙脑疫苗的方法仍有待改进。

发明内容

本发明是基于发明人的下列发现而完成的：

现阶段，我国使用猪乙型脑炎活疫苗（SA14-14-2株）进行猪预防接种，注射后3周可产生坚强的免疫力，能有效预防猪乙脑的发生。目前商业化的猪乙型脑炎活疫苗采用原代地鼠肾细胞转瓶工艺进行生产，由于原代细胞制备过程复杂，并且使用转瓶培养细胞，整个生产过程完全采用人工手工操作，容易造成制品的污染以及产品质量的不稳定，不适合乙脑疫苗工业化大规模生产。

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的申请人经过艰苦的努力寻找并发现了可解决上述技术问题的关键因素——BHK-21细胞。BHK-21细胞是一种可连续传代培养的地鼠肾细胞，已经成功用于猪口蹄疫疫苗、犬狂犬病疫苗的生产，是一种良好的疫苗生产用细胞。与原代地鼠肾细胞比较，使用BHK-21细胞制备疫苗，由于BHK-21细胞可连续传代培养，经多代扩增培养后可得到大量细胞用于制备疫苗，因此克服了细胞来源限制问题。同时由于BHK-21细胞可采用生物反应器悬浮培养，在严格可控的培养条件下，细胞能在最适合的条件下生长繁殖，细胞生长迅速且状态良好，培养获得的细胞密度远远高于转瓶培养，更适合工业化生产。

此外，本发明的发明人还发现，BHK-21细胞对乙脑病毒敏感，接种乙脑病毒后3-4天出现细胞病变，适于乙脑病毒的培养。

由此，本发明提出了一种乙脑疫苗及其制备方法。

根据本发明的一个方面，本发明提出了一种制备猪乙脑疫苗的方法。根据本发明的实施例，该方法包括以下步骤：利用生物反应器将BHK-21细胞进行悬浮培养，以便获得BHK-21细胞悬浮液；将SA14-14-2株乙脑病毒接种于BHK-21细胞悬浮液中进行培养，以便获得富集乙脑病毒的培养液；以及将富集乙脑病毒的培养液依次进行冻融和离心，以便收集富集的乙脑病毒，获得猪乙脑疫苗。发明人惊奇地发现，利用该方法，能够以工业化规模、高效地生产猪乙脑疫苗，并且获得的猪乙脑疫苗质量优良，病毒含量比现有商业化转瓶制备的疫苗高10倍，能够有效地用于猪乙脑预防接种，且免疫效力高、免疫效果稳定。此外，根据本发明的实施例，该方法还具有设备体积小、节省空间，放大容易，工艺可控性好，对操作人员要求不高等优点。