[发明专利]猪乙脑疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种制备猪乙脑疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

利用生物反应器将BHK-21细胞进行悬浮培养，以便获得BHK-21细胞悬浮液；

将SA14-14-2株乙脑病毒接种于所述BHK-21细胞悬浮液中进行培养，以便获得富集乙脑病毒的培养液；以及

将所述富集乙脑病毒的培养液依次进行冻融和离心，以便收集富集的乙脑病毒，获得所述猪乙脑疫苗。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，利用生物反应器将BHK-21细胞进行悬浮培养进一步包括：

于摇瓶中，利用含10体积%新生牛血清的MD611培养基将BHK-21种子细胞依次进行第一悬浮培养和转种培养，以便获得第一BHK-21细胞悬浮液，其中经过第一悬浮培养的BHK-21种子细胞的细胞密度不小于2.3×10⁶细胞/ml，所述第一BHK-21细胞悬浮液中细胞密度不小于2.5×10⁶细胞/ml；

将所述第一BHK-21细胞悬浮液接种于第一生物反应器中，并添加含2体积%新生牛血清的MD611培养基，进行第二悬浮培养，以便获得第二BHK-21细胞悬浮液，所述第二BHK-21细胞悬浮液中细胞密度不小于3.4×10⁶细胞/ml；以及

将所述第二BHK-21细胞悬浮液接种于第二生物反应器中，并添加含2体积%新生牛血清的MD611培养基，进行第三悬浮培养，以便获得所述BHK-21细胞悬浮液，所述BHK-21细胞悬浮液中细胞密度不小于1.5×10⁶细胞/ml，

其中，所述第二生物反应器的容量大于所述第一生物反应器，所述第一生物反应器的容量大于所述摇瓶，

优选地，所述摇瓶的容量为250ml，所述第一生物反应器的容量为10L，所述第二生物反应器的容量为100L。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一悬浮培养是在37℃温度，120rpm转速下培养3-4天，

任选地，所述转种培养是按1：4的体积比例进行细胞转种，在37℃温度，120rpm转速下培养3-4天，

任选地，所述第二悬浮培养是在36.5℃温度，90rpm转速，pH 7.15，溶氧浓度50%下培养4天，

任选地，所述第三悬浮培养是在36.5℃温度，90rpm转速，pH 7.15，溶氧浓度50%下培养3天。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述SA14-14-2株乙脑病毒的病毒滴度不小于10^8.0TCID₅₀/ml。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将SA14-14-2株乙脑病毒接种于所述BHK-21细胞悬浮液中进行培养进一步包括：

将SA14-14-2株乙脑病毒按照1：100的比例接种于所述BHK-21细胞悬浮液中，并于35℃温度，90rpm转速，pH 7.3，溶氧浓度50%下培养3天，

任选地，所述富集乙脑病毒的培养液中细胞密度不小于3.3×10⁶细胞/ml。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，于-20℃下进行所述冻融两次，

任选地，于2000rpm转速下进行所述离心，并弃去沉淀。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述富集的乙脑病毒的病毒滴度不小于10^7.5TCID₅₀/ml，优选为10^8.3TCID₅₀/ml。

8.一种猪乙脑疫苗，其是通过权利要求1-7任一项所述的方法制备的。

9.根据权利要求8所述的猪乙脑疫苗，其特征在于，所述猪乙脑疫苗包含：

病毒滴度不小于10^7.5TCID₅₀/ml，优选为10^8.3TCID₅₀/ml的SA14-14-2株乙脑病毒；

1重量%的明胶；以及

5重量%的蔗糖。

10.根据权利要求9所述的猪乙脑疫苗，其特征在于，所述猪乙脑疫苗呈冻干状态。