[发明专利]沙门氏菌肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌PCR焦磷酸法的检测引物试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌PCR-焦磷酸法的检测引物，其特征在于包括PCR引物和测序引物：

针对沙门氏菌的PCR引物：

5’-TCACCGAAAGACCAACAGAA-3’；

5’-GGTGGAACTCGCTGAAATGA-3’；

测序引物：5’-CGAAAGACCAACAGAAG-3’；

针对肠炎沙门氏菌的PCR引物：

5’-GCATGTTCTGGAAAGCCTCTTTAT-3’；

5’-TCGTTCTTCTGGTACTTACGATGA-3’；

测序引物：5’-AAAAAGGTTTAGTAAATCAG-3’；

针对鼠伤寒沙门氏菌的PCR引物：

5’-AAGCTAAGTGTGGGGGCTAGTAT-3’；

5’-GGGTTTGTTTTTGATGATACAGG-3’；

测序引物：5’-AGTATTGATAAATAATGGTT-3’。

2.一种沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌PCR-焦磷酸法的检测试剂盒，包括DNA提取试剂，PCR反应试剂，单链模板制备试剂，焦磷酸测序试剂，PCR引物和测序引物，其特征在于，所述的PCR引物和测序引物为：

针对沙门氏菌的PCR引物：

5’-TCACCGAAAGACCAACAGAA-3’；

5’-GGTGGAACTCGCTGAAATGA-3’；

测序引物：5’-CGAAAGACCAACAGAAG-3’；

针对肠炎沙门氏菌的PCR引物：

5’-GCATGTTCTGGAAAGCCTCTTTAT-3’；

5’-TCGTTCTTCTGGTACTTACGATGA-3’；

测序引物：5’-AAAAAGGTTTAGTAAATCAG-3’；

针对鼠伤寒沙门氏菌的PCR引物：

5’-AAGCTAAGTGTGGGGGCTAGTAT-3’；

5’-GGGTTTGTTTTTGATGATACAGG-3’；

测序引物：5’-AGTATTGATAAATAATGGTT-3’。

3.一种非诊断目的的沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）对样品进行增菌培养，提取增菌液中菌体的基因组DNA作为模板；

（2）分别使用权利要求1所述的PCR引物分别进行PCR反应，回收PCR产物，制备单链模版，然后应用权利要求1所述的测序引物对相应的PCR产物进行焦磷酸测序，自测序引物3/端后的第一个碱基开始测序，当前30个碱基序列为GCCTGTGGGTACTTCTCCTGCCAGTATAAT时，判断样品中含有沙门氏菌，当前30个碱基序列为CCTGTTGTCTGCTCACCATTCGCCAGCCAC时，判断样品中含有肠炎沙门氏菌，当前30个碱基序列为TACAACCGGAGTGCACATTAATCCCGCAGC时，判断样品中含有鼠伤寒沙门氏菌。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述的样品为食品或海鲜。

5.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的食品为肉制品。

6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述的肉制品为猪肉。

7.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，所述的海鲜为售卖的对虾。

8.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述的PCR反应，其扩增体系为50μL，PCR Mix Buffer 25μl，Taq酶5μl，MgCl₂ 1μl，10μM上、下游引物各2μl，DNA模板1μl，去离子水14μl，PCR反应条件为预变性95℃5min；95℃15s，65℃30s,，72℃30s，45个循环；72℃12min。