[发明专利]一种总糖快速分析方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生化分析领域，是一种基于自动水解和补色微量热滴定过程的待测物质中总糖含量的快速分析方法。

背景技术：

糖类是生物体除蛋白质和核酸以外的又一类重要的物质。糖也是所有生物的重要构成物质。人类、动物、微生物的食物和能量来源。食品、酒类、中药材中的总糖含量，关系到产品的品质；培养基、发酵液中的总糖是生物加工过程重要的生化参数。总糖的快速测定一直是研究者、生产者共同关注的技术热点。

由于总糖测定的现实意义，文献中报道的总糖的测定方法较多。归纳起来主要有分光光度比色法、近红外光谱法、滴定法等。如有文献用苯酚-硫酸法、3，5-二硝基水杨酸法、蒽酮比色法测定葡萄酒中总糖含量。该法操作简单、快速、易于掌握，但常因待测物颜色及干扰物质过多而导致吸光度值测定误差较大。有文献报道待测试样经沉淀剂除去蛋白质后，加酸转化成还原糖，再在加热条件下以次甲基兰作指示剂，转化后的还原糖能与已标定过的碱性酒石酸铜液定量反应，根据消耗试样转化液的体积，从而测定待测物中总糖的含量。该法系滴定法，也是目前国内大多数厂家使用的传统常规检测方法，本法准确度较高，但手工测定繁琐，且滴定过程易受颜色干扰。近来有较多用近红外光谱(NIR)测定总糖的文献报道，该法具有样品前处理简捷、无损特点，但是需要针对不同待测物质测量大量数据，建立不同数学模型，误差也较大。目前与总糖分析相关的专利200910037365.0“快速测定半纤维素提取液中的戊糖和己糖含量的方法”描述了戊糖和己糖在等摩尔吸收状态下采用双波长测定半纤维素提取液中的戊糖和己糖含量，该专利运用双波长吸光度法进行戊糖和己糖测定。本发明是基于待测物质自动高精度控制水解和水解产物补色自动微量热滴定过程，克服了水解液颜色、浊度等对滴定终点判断的干扰，实现总糖仪器化快速分析，目前国内外未见相关报道。

发明内容：

本发明的总糖快速分析方法建立在自动控制的水解条件稳定水解技术和水解液自动补色微量热滴定技术上完成的。本发明实现了总糖的自动化测定，克服了目前国内传统大多数厂家使用的手工滴定终点易受干扰，难于判断的缺点。本发明的具体内容如下：

1、一种总糖含量的快速分析方法基于待测物质自动水解和水解液自动微量补色热滴定方式完成。

2、总糖分析方法是建立在精确控制水解条件样品自动快速水解基础上的。水解方式可根据样品的特点采用酸水解、酶水解或者两者结合的水解方式。

3、总糖分析滴定方式可以是水解池原位滴定或者将水解液自动稀释、自动进样的离位自动微量热滴定方式。

4、水解方式是在精确温度、酸碱度、时间控制条件下进行的精密控制过程的水解，根据样品的不同情况，样品的水解加热方式可以采用欧姆加热、水浴加热、油浴加热等直接或间接模式。

5、原位微量热滴定是在水解池中采用耐酸碱的特殊材料电极先欧姆加热水解，水解完成后自动调节水解液酸碱度，然后再进行微量热滴定，采用补色光度传感器自动判断滴定终点的滴定分析方法。

6、离位微量热滴定方式，水解和滴定不在同一反应池中进行；待测物在水解反应池完成水解后，自动稀释，自动取样进入微量热滴定池内进行补色光度滴定。

7、本发明的适应测定对象包括发酵液、微生物培养基、水果蔬菜、酒类、食品、中药材、粮食等。

具体实施方式：

实施例1柠檬酸发酵液总糖测定

1)取柠檬酸发酵液5毫升与特制四氟材料反应池中，采用耐酸碱石墨特殊材料加热电极，加热15分钟。

2)试剂泵装置将合适浓度斐林试剂甲乙液各2.5毫升加入特制四氟材料反应池，此时反应池液体酸碱度自动调整到适合斐林试剂反应的酸碱度。

3)采用耐酸碱特殊材料电极，加热反应池液体至设定温度97℃-100℃，反应池带电磁搅拌，实现反应池内反应液体的温度平衡。

4)葡萄糖滴定泵自动启动，滴入葡萄糖溶液。滴定过程中启动温度控制系统，保障在动态过程中反应池液体温度的平衡：补色光度传感器启动，投射到滴定液体补色的光源开启，光电接收系统开启，接收反应液体颜色的突变，判断反应终点。

5)根据加入的样品量，消耗的葡萄糖，自动计算出柠檬酸发酵液的总糖含量。

6)柠檬酸发酵液总糖测定结果如下：

表1柠檬酸发酵液总糖的测定结果

实施例2干红葡萄酒中总糖的快速测定

1)取干红葡萄酒5毫升与特制四氟材料反应池中，采用耐酸碱特制加热电极，加热15分钟。