[发明专利]一种用于滤纸干血片的蛋白洗脱液

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种用于滤纸干血片的蛋白洗脱液。

背景技术

新生儿疾病筛查的普及和推广使一些危害儿童生命、导致儿童体格及智能发育障碍的先天性遗传代谢疾病能够得以早期诊断，并且可以在新生儿临床症状未出现之前或症状不明显时就能给予及时治疗，避免或降低患儿机体各器官受到的不可逆损伤产生。

目前，已有化学发光免疫检测、时间分辨荧光免疫检测、酶联免疫吸附、放射免疫分析等多项以免疫检测为基础的检测方法被应用在新生儿疾病筛查上。但由于新生儿采血的特殊性，新生儿疾病筛查都是对其足跟血滴在S&S903滤纸上形成的滤纸干血片中的标志物进行检测，因此需要将标志物重新从滤纸干血片上溶解到特定溶液中，再进行相关分析检测，比如：新生儿先天性甲状腺功能减低症的筛查，需要从滤纸干血片上将促甲状腺激素(TSH)溶解出来，再进行免疫检测。

目前，新生儿疾病筛查试剂盒一般用Tirs-HCl缓冲液作为滤纸干血片的蛋白洗脱液，将滤纸血片上蛋白洗脱下来以后，再进行免疫检测，不仅蛋白溶出率低，降低了免疫检测的灵敏度，而且干扰物质的存在，又降低了检测的准确性。此外，Tris-HCl洗脱滤纸干血片需要时间也较长，一般要多次洗板，增加了检测时间。因此，用于滤纸干血片的高效蛋白洗脱液已经成为了提高用于新生儿疾病筛查的免疫检测试剂的灵敏度、准确性、检测速度的关键因素。

发明内容

本发明的目的是提供一种用于滤纸干血片的蛋白洗脱组合物及蛋白洗脱液。

本发明所述蛋白洗脱组合物，由NP40、(2-羟丙基)-β-环糊精、(羟丙基)甲基纤维素和小牛血清组成。由所述蛋白洗脱组合物配制的蛋白高效洗脱液，包含表面活性剂、稳定剂、辅助稳定剂，所述表面活性剂为10‰-65‰的NP40，所述稳定剂为0.1‰-1‰的(2-羟丙基)-β-环糊精，所述辅助稳定剂为0.1‰-1‰的(羟丙基)甲基纤维素。

NP40是一种温和的非离子表面活性剂，一般由超过97%的聚-(氧代-1，2-乙二亚甲基)-α-壬基苯基-ω-羟基，少于1%的支链二壬基苯基聚氧乙烯醚，小于3%的聚乙二醇构成。在生物医学上，常备用在细胞裂解液中，用于破坏细胞膜。1%浓度NP40的基本可以破坏掉胞膜，并且结合特定的缓冲液就可以获得胞浆蛋白。

(2-羟丙基)-β-环糊精是β-环状糊精的一种羟烷基化衍生物，其结构式如下：

(2-羟丙基)-β-环糊精具有优良的包络作用，能提高被包络物质的稳定性，而且具有水溶性，能够在生物体内提高被包络物质的释放速度。

(羟丙基)甲基纤维素是一种非离子型纤维素，具有保持溶液pH稳定性和提高分散性的能力，其水溶液也具有表面活性，是一种常用稳定剂，其结构式如下：

发明人经过大量实验研究发现，NP40、(2-羟丙基)-β-环糊精和(羟丙基)甲基纤维素的混合使用，可以有效提高滤纸干血片上蛋白的洗脱效率，并能降低干扰物质的影响。用含有10‰至65‰的NP40、0.1‰至1‰的(2-羟丙基)-β-环糊精、0.1‰至1‰的(羟丙基)甲基纤维素的洗脱液，洗脱滤纸干血片上蛋白，采用化学发光免疫检测技术进行免疫检测，能够在已包被好抗体的包被板上直接进行检测，洗脱和检测能通过一步反应实现，检测时间只需3小时，并且在室温下就能实现检测，检测本底值比普通蛋白洗脱液低24.8到52.7倍，检测灵敏度能被显著提高。

在本发明的具体实施方式中，所述表面活性剂为10%、50‰或65‰的NP40，所述稳定剂为0.1‰或1‰的(2-羟丙基)-β-环糊精，所述辅助稳定剂为0.1‰或1‰的(羟丙基)甲基纤维素。

作为优选，本发明所述蛋白高效洗脱液还包含防腐剂。在本发明的具体实施方式中，防腐剂为1‰的Proclin-300。

新生儿疾病筛查检测的是新生儿足跟血滤纸干血片中的目的蛋白，需要从滤纸干血片中将目的蛋白洗脱下来，再进行免疫分析检测，而全血中存在的大量血红蛋白、脂类、类脂类等物质，滤纸上的纤维物质等都会对滤纸干血片中蛋白的溶出率、免疫检测的准确性和灵敏度产生干扰，使免疫检测分析技术的优点不能完全体现。

本发明所述蛋白洗脱液用于新生儿疾病筛查滤纸干血片的蛋白洗脱的洗脱率高且稳定，而且成本较低、易于配制，可广泛应用于以蛋白为检测标志物，并且是基于免疫检测技术的新生儿疾病筛查产品，从而大大缩短检测时间，提高检测灵敏度和准确性。经重复多次试验，证明本发明具有如下几个优点：