[发明专利]检测OTOF基因c.1671_1673delG突变的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及基因检测领域，具体涉及用于检测OTOF基因突变的试剂盒；本发明还涉及新的OTOF突变基因及其在诊断和/或治疗感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍的应用。

背景技术

听神经病/听神经病谱系障碍（Auditory Neuropathy Spectrum Disorders,ANSD）是由第Ⅷ颅神经的听支受损而引起的一种特殊的感音神经性聋。表现为声音可以通过外耳、中耳正常的进入到内耳，但声音信号不能同步地从内耳传输到大脑的听功能异常性疾病。临床听力检查表现为诱发性耳声发射正常、听性脑干反应严重异常的一组听功能障碍症候群。听神经病谱系障碍多自幼年或青春期起病，在高危婴幼儿中发病率约为0.23%，在各种原因所致的ABR异常的聋病患儿中的发病率高达11%，无性别差异。目前研究表明，听神经病谱系障碍的发病主要和遗传、免疫、感染、中毒、代谢等相关因素相关。

按照是否合并其他系统疾病可将遗传性听神经病谱系障碍分为两类：一类是合并有其它颅神经和/或周围神经病损的综合征型疾病，如Charot Marie Tooth综合征:CMT1型(脱髓鞘型)及CMT2型(轴突型)、费里德赖希共济失调综合征等；另一种是仅有听力下降表现的非综合征型听神经病谱系障碍。非综合征型听神经病谱系障碍由于表型单一，基因型与表型之间有较好的对应关系，逐渐成为近年来的研究热点。Starr等根据发病部位的不同将其分为TYPE I型（病变部位在听神经）和TYPE II型（病变部位在内毛细胞及突触）。

按照遗传模式的不同可将听神经病谱系障碍分为常染色体显性遗传（AUNA1)、常染色体隐性遗传（NSRAN）和X连锁隐性遗传（AUNX1)以及线粒体DNA突变等。2003年，Varga等运用连锁分析的方法，将四个家系定位在包含OTOF基因所在的2p23区域内，确定OTOF为第一个发现且较为常见的与非综合征型听神经病谱系障碍相关的基因。OTOF基因DNA序列全长101496bp，包含48个外显子，定位于2p23。OTOF基因的编码区，含终止密码子如SEQ ID NO.1所示。OTOF长亚型变异体的mRNA长度为7172bp，所编码的蛋白质otoferlin（如SEQ ID NO.2所示）包含1997个氨基酸，可能参与突触囊泡的融合。Otoferlin具有6个钙离子结合区域（C2domain），其中后4个含有完整的5个天冬氨酸残基，可以与钙离子结合，且存在1个羧基端跨膜区域（TM），这些结构在脊椎动物都是高度保守的。2006年，Petit教授研究小组观察到小鼠otof基因编码的蛋白质otoferlin在耳蜗内毛细胞与传入神经元所形成的带型突触处呈高表达。敲除otof基因的纯合小鼠表现为极重度耳聋，其内毛细胞带型突触形态保持正常，钙离子流通也正常，但是突触囊泡的胞吐作用却完全废止，因此得出结论：otof基因编码的蛋白质otoferlin作为一种钙离子感应器，在内毛细胞带型突触处触发膜融合，从而在内毛细胞突触囊泡的胞吐过程中发挥着重要作用。因此由该基因突变导致的感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍患者病变部位多在耳蜗内毛细胞或突触，人工耳蜗手术治疗效果较好。而国内外对于感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍患者OTOF基因的筛查发现，携带有该基因突变的听神经病谱系障碍患者临床多以TypeII型表现为主，适合于人工耳蜗植入手术治疗并可取得良好的效果。而TYPE I型听神经病谱系障碍患者病变部位在听神经，位置深在，目前尚无有效的治疗方法。因此，利用对感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍患者的OTOF基因的检测进行辅助分型，对于临床治疗具有重要的指导意义。

发明内容

本发明的一个目的在于提供用于检测OTOF突变c.1671_1673delG (X579)基因的试剂盒，其技术方案为：

一种用于检测与感音神经性聋及听神经病/听神经病谱系障碍相关的位于OTOF基因的c.1671_1673delG(X579)突变的试剂盒，所述试剂盒包括：

从待测样品中提取DNA的试剂；

用于扩增样本DNA的PCR反应试剂；

对PCR扩增产物进行测序的试剂；

其中，所述扩增样本DNA的PCR反应试剂包括PCR引物，所述PCR引物扩增的目标片段包含OTOF基因第1671-1673位碱基。

具体地，上述PCR引物为选自：

OTOF-F-1（SEQ ID NO.3）:5’-CTGAATGGCACACATGAAGTTCT-3’，