[发明专利]侧耳菌发酵生产截短侧耳素的培养基及发酵方法

说明书

技术领域

本发明属于发酵技术领域，特别是涉及一种侧耳菌生产截短侧耳素的培养基及发酵方法。

背景技术

截短侧耳素(Pleuromutilin)是由侧耳菌(Pleurotus mutilus)通过发酵产生的一类广谱的二萜烯类抗生素，是截短侧耳素类半合成衍生物的前体。截短侧耳素类是一大类具有较好抗菌活性的抗生素家族，能够有效抑制大部分革兰氏阳性菌以及部分革兰氏阴性菌。

目前，国内大部分生产厂家侧耳菌的种子培养基基础原料是酵母粉、葡萄糖、糊精、磷酸二氢钾、硫酸铵；发酵培养基基础原料是豆油、葡萄糖、热榨黄豆饼粉、酵母粉、磷酸二氢钾、硫酸镁、硝酸钙、氯化钠和硫酸铁。以上述培养基基础发酵生产截短侧耳素所存在的问题是：

1、截短侧耳素发酵培养基采用豆油作为基础碳源之一，因不同生产厂家提供的豆油质量不一致，导致高温灭菌后容易出现豆油与固体颗粒结块现象，产生较多泡沫，泡沫会影响发酵过程中的氧传递，导致菌体生长异常。同时，随着高温时间延长，豆油中所含有的部分亚油酸、油酸和亚麻酸分解为小分子化合物并进一步氧化为有机酸，酸价增大，导致发酵液pH下降。pH变化影响发酵培养基中各种酶的活性、菌体对基质的利用速率和细胞结构，从而影响了菌种生长，减少初级、次级代谢产物的合成。另外，豆油中除含有脂肪外，还含有磷脂，甾醇类物质以及少量蛋白质和麦胚酚等物质，易引起豆油酸败。豆油在长期储存中，油色会由浅逐渐变深，原因是油脂自动氧化，生成醛、酮、酸类有机物。所以豆油是不宜长期贮藏。

2、发酵培养基中使用热榨黄豆饼粉，由于生产工艺的蒸炒温度在130～140℃，因而导致其含油量和蛋白质含量明显降低，低于冷榨豆饼粉。所以，发酵过程中，热榨黄豆饼粉用量加大，最终导致生产成本大，发酵生产成本一般在150～250元/公斤。

3、采用上述培养基发酵，由于豆油、热榨黄豆饼等原辅料利用率低，导致菌渣产量低，影响截短侧耳素后提取收率。

4、采用上述培养基发酵，发酵效价单位低，其发酵单位仅为9000～11000u/ml。

发明内容

本发明目的就在于克服上述截短侧耳素发酵单位低、生产成本高等技术缺陷，提供一种可替代热榨黄豆饼粉、豆油，达到提高发酵单位，同时最大限度的降低原辅料来源受环境影响因素，保证其供应充足，实现截短侧耳素稳定、高效地生产的侧耳菌发酵生产截短侧耳素的培养基。

本发明的另一目的是提供利用上述培养基生产截短侧耳素的发酵方法。

为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种侧耳菌发酵生产截短侧耳素的培养基，包括一级种子培养基、二级种子培养基和发酵培养基，其特征在于一级种子培养基和二级种子培养基中含有冷榨黄豆饼粉和有机硅消泡剂；发酵种子培养基中含有冷榨黄豆饼粉、有机硅消泡剂和玉米油。

上述一级种子培养基的组成为：葡萄糖5～20g/L、冷榨黄豆饼粉20～50g/L、磷酸氢二钾1～10g/L、硫酸镁0.1～0.4g/L、硝酸钙0.1～0.4g/L、氯化钠0.1～0.2g/L、有机硅消泡剂0.3～0.9g/L。

上述二级种子培养基的组成为：葡萄糖18～22g/L、冷榨黄豆饼粉10～15g/L、磷酸氢二钾1～4g/L、硫酸镁0.2～0.4g/L、硝酸钙0.2～0.4g/L、氯化钠0.1～0.2g/L、有机硅消泡剂0.5～0.9g/L。

上述发酵培养基的组成为：葡萄糖20～30g/L、冷榨黄豆饼粉15～20g/L、玉米浆15～20g/L、硫酸镁0.2～0.4g/L、磷酸氢二钾1～4g/L、硝酸钙0.5～1g/L、酵母粉2～5g/L、玉米油5～15ml/L、有机硅消泡剂0.2～0.5g/L。

一种利用上述培养基的发酵方法，其工艺步骤包括：

1）一级种子培养：首先将一级种子培养基灭菌、冷却，用无菌空气保压（压力控制在0.01～0.02MPa）。要求灭菌后的一级种子培养基pH控制在5～8；氨基氮含量控制在10～50%；还原糖含量控制在1～5%。在火焰保护下，将已经培养好的侧耳菌母瓶种子液接入一级种子罐进行培养，接种量控制在一级种子培养基体积的5～10％。

培养条件为：罐压0.02～0.06MPa；罐温20～28℃；空气流量：0～15h：1～5m³/h；15h～移种：5～10m³/h；搅拌转速100～120r/min；培养时间40～60h。