[发明专利]一种利用类波氏真眼点藻生产EPA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及微藻领域，确切地说是指一种利用类波氏真眼点藻生产EPA的方法。

背景技术

二十碳五烯酸(EPA，ω-3)是一种多不饱和脂肪酸，它具有诸多的生物学活性，受到人们的广泛关注。最早发现EPA对人类健康有益的学者是丹麦的Bang和Dyerbery(1978)，随后，众多科学家对EPA在营养学和医学上的功能展开了深入的研究，发现EPA是前列腺素及衍生物前列环素、凝血烷、白三烯等激素类化合物的前体，具有抗血栓、降血脂、防止血小板聚结、舒张血管等功能，并对人类心脑血疾病、关节炎、肾炎等疾病有良好的防治作用，此外，EPA还能促进脑细胞的生长发育改善大脑机能，但陆生生物中EPA含量较少，天然EPA通常在海洋生物中较为丰富，如藻类、海生鱼类、某些海洋软体动物、棘皮动物等。

目前，市场上的EPA产品主要来源于深海鱼油，然而其产量仅能满足世界需求量的60％，并且从鱼油中提取EPA的工艺复杂且收率低，获得的EPA具有明显的鱼腥味，难以满足人们对产品的要求。微藻是一类系统发生各异、个体较小、通常为单细胞或群体的、能进行光合作用的水生(或陆生、气生、共生)低等植物，是自然界起源最早、分布最广、种类和数量最多的生物质资源。在已分离的产油的微藻中，金藻纲(Chrysophyceae)、黄藻纲(Xanthophyceae)、硅藻纲(Centricae)、红藻纲(Rhodophyceae)、绿藻纲(Chlorophyceae)和隐藻纲(Cryptophyceae)中都有富含EPA的藻类，如紫球藻(Porphyridium cruentum)、三角褐指藻(Phaeodactylum tricornutum)、球等鞭金藻(Isochrysis galbana)、眼点拟微绿球藻(Nannochloropsis oculata)、蒜头藻(Monodus subterraneus)等。目前世界上许多学者已经对微藻生产EPA进行了大量的研究工作，主要涉及藻株筛选、培养基和培养条件的优化、规模化生产等，然而目前大部分研究工作仅关注微藻是否具有较高的EPA含量，却忽略了该藻株的生物量产量，如将其用于EPA的商业化生产，很难获得成功。

国内利用微生物进行EPA生产的发明专利共四项，它们分别是：1)产二十碳五烯酸油脂的腐霉及该油脂的发酵制备方法(余龙江，CN101434908A)，该专利公开了一种利用腐霉(Pythium sp.)HUST-RBB12菌种进行EPA生产的方式，其EPA产量可达2.1g/L；2)从绿色巴夫藻制备和纯化二十碳五烯酸甲酯的方法(刘志礼，CN1544413A)，该专利主要保护由绿色巴夫藻中提取EPA的化学工艺；3)一种高产二十碳五烯酸(EPA)的希瓦氏菌基因工程菌(王风平，CN101942409A)；4)用于高水平生产二十碳五烯酸的优化解脂耶氏酵母菌株(纳幕尔杜邦公司，CN101970638A)。国外对于微藻生产多不饱和脂肪酸(PUFAs)同样进行了大量的研究工作，目前也有几家公司已经实现了商业化生产，如Martek公司利用Nitzschia alba进行EPA的生产，Omega Tech公司利用Thtanstochytrids sp.进行PUFAs的生产，Nilssin Oilssin Oil mills公司利用Crythecodinium cohnii进行DHA的生产。

从深海鱼油中提取或通过微生物厌氧发酵的方式生产EPA，虽然已经实现了商业化生产，然而就技术本身而言，仍然存在下述缺点：

1)鱼油的质量会受鱼的种类、捕鱼季节和地点影响；环境污染、非目的脂肪酸及鱼腥味也会影响鱼油的质量；另外，鱼油还具有加工成本高、易氧化等缺点，随着渔业资源的日益紧张，鱼油将很难满足人们对EPA的市场需求；

2)目前已分离的富含EPA的厌氧微生物种类较少，厌氧微生物生长需要丰富的培养基，且培养过程中容易受到细菌的污染，需要严格控制无菌化操作，增加了培养成本，新发现的生产EPA的厌氧微生物需要进行详细安全性评价；

国外虽然有部分企业利用微藻进行EPA的生产，但其所用藻株(Nitzschia alba)需要进行异养培养，培养工艺复杂。

发明内容

针对上述缺陷，本发明解决的技术问题在于提供一种利用类波氏真眼点藻生产EPA的方法，可以实现EPA的高效生产。

为了解决以上的技术问题，本发明提供的利用类波氏真眼点藻生产EPA的方法，其中：