[发明专利]北美红杉树组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种北美红杉树组织培养方法，是一种农林苗木无性快速繁殖技术。

背景技术

    北美红杉树是一种大径级用材种也是重要的园林绿化树种。现在国内北美红杉树繁殖主要是种子繁殖，而种子主要来源于美国进口，种量有限。北美红杉树扦插繁殖生根率低，并且侧枝扦插苗因丧失顶端优势，失去没有利用价值。因此通过组织培养技术，获得大量优质北美红杉树幼苗，对北美红杉树推广具有重要意义。现在国内不少学者进行了北美红杉树组织培养的研究，但因为生根率低，繁殖周期长或外植体取材局限了其应用。

发明内容

为了克服现在北美红杉树组织培养中存在的不足，本发明提供一种北美红杉树组织培养方法，该组织培养方法不仅外植体污染率低，诱导率高、增值率高、生根率高，繁殖周期短，而且移栽成活率高。

植物组织培养的理论依据是植物细胞全能型，即植物的每个细胞都包含着该物种的全部遗传信息，从而具备发育成完整植株的遗传能力，在适宜条件下，任何一个细胞都可以发育成一个新个体。选择适宜的外植体，在无菌条件下消毒，接种到各类培养上，建立无菌培养体系，提供适宜的温度、光照和湿度，培育成新个体。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种北美红杉树组织培养方法，利用北美红杉树嫩枝，将北美红杉树嫩枝清洗后，在无菌条件下，清洗后的北美红杉树嫩枝用质量浓度70%的酒精消毒30s后， 质量浓度0.1% HgCl₂处理15min，无菌水冲洗4—5次，取1cm长的普通茎尖做外植体，接种诱导培养基，污染率低于5%，培养温度26±1℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx，培养时间为40天；然后截取1.5cm的茎段转接增殖培养基培养，培养温度26±1℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx；培养时间为30天； 1.5cm的茎尖转接生根培养基：培养温度24±1℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx；培养时间为50天，得生根率为75%以上的组培苗；组培苗洗净根部培养基,移植于基质中，基质配方为：草炭土：珍珠岩 3∶1， 80℃下灭菌1小时，驯化温度24±1℃，湿度90%，光照12h，光照强度2000Lx，10天后逐渐降低湿度，增加光照，20天后移栽大田；

所述的诱导培养基以MS为基础培养基，添加NAA 0.1mg/L,KT 0.5 mg/L，蔗糖3%，琼脂0.6%，pH 6.8；

所述的增殖培养基以MS为基础培养基，添加NAA 0.3mg/L,KT 0.5 mg/L，BA 1.0 mg/L，蔗糖3%，琼脂0.6%，pH 6.8；

所述的生根培养基以1/2MS为基础培养基，添加NAA 0.3mg/L,KT 0.5 mg/L，BA 1.0 mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%，pH 6.8。

本发明的有益效果是：本发明以茎尖外植体材料,选择抗性母株取材,保证了优良性状的遗传稳定性；完善了消菌处理方法；同时筛选出了适合激素种类及浓度,解决了目前研究中存在的生产周期长，污染率高，生根率低，移栽成活率低的问题,成功建立了北美红杉树的组织培养体系。茎尖分化率达100％，生根率为75%，移栽成活率在95%以上。

具体实施方式

1、取北美红杉树嫩枝用0.1%洗衣粉水浸洗30min后，用自来水冲洗1h备用。

2、无菌条件下，北美红杉树嫩枝用70%的酒精消毒30s后， 0.1% HgCl₂处理15min，无菌水冲洗4—5次，取1cm长的普通茎尖做外植体，接种诱导培养基，污染率低于5%。诱导培养基以MS为基础培养基，添加NAA0.1mg/L,KT0.5 mg/L，蔗糖3%，琼脂0.6%，pH 6.8，培养温度26±1℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx。培养时间为40天，截取1.5cm的茎段转接增殖培养基。茎尖分化率达100％。

3、增殖培养基以MS为基础培养基，添加NAA0.3mg/L,KT0.5 mg/L，BA1.0 mg/L，蔗糖3%，琼脂0.6%，pH 6.8，培养温度26±1℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx。培养时间为30天，取1.5cm的茎段转接增殖培养基，1.5cm的茎尖转接生根培养基。

4、生根培养基以1/2MS为基础培养基，添加NAA0.3mg/L,KT0.5 mg/L，BA1.0 mg/L，蔗糖2%，琼脂0.6%，pH 6.8，培养温度24±1℃，湿度70%，光照12h，光照强度2000Lx。培养时间为50天，生根率为75%以上。

5、组培苗洗净根部培养基,移植于基质中，基质配方草炭土：珍珠岩 3∶1， 80℃灭菌1小时，驯化温度24±1℃，湿度90%，光照12h，光照强度2000Lx，10天后逐渐降低湿度，增加光照，20天后移栽大田。移栽成活率在95%以上。