[发明专利]一种白血病干细胞靶向可溶性蛋白TrxHis-hSIRPα

说明书

技术领域

本发明涉及一种可溶性蛋白，它是由人CD47受体SIRPα的胞外段，与其氨基末端融合的TrxHis表达标签组成的一种白血病干细胞靶向可溶性蛋白TrxHis-hSIRPα，属于医药生物技术领域。

背景技术

信号调节蛋白α（Signal-regulatory proteinα，SIRPα），又称为SHPS-1，SIRPA，p84及BIT，属于免疫球蛋白超家族成员。它主要表达在巨噬细胞、神经元、树突细胞及中性粒细胞。这种跨膜蛋白包含胞外区的三个免疫球蛋白样结构域及胞浆区的酪氨酸磷酸化位点，其胞浆区在大鼠，小鼠和人之间高度保守，含有酪氨酸残基并形成抑制性受体基于酪氨酸的抑制性基序ITIM，从而激活包含SH2结构域的蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1及SHP-2。SHP-1主要表达在造血细胞及上皮细胞，可负性调节这些细胞的许多功能，SHP-2表达广泛，可通过调节小GTP结合蛋白Ras及Rho而发挥促进细胞生长、迁移及分化等正向调节功能。因此，SIRPα就作为一个船坞蛋白对细胞膜外的刺激产生反应，并通过募集SHP-1或SHP-2而发挥它特殊的生物学功能。此外，SIRPα也可以连接Src激酶相关蛋白SCAP2(也称为SKAP55hom/R)以及Fyn连接蛋白FYB(也称为SLAP-130)而引起明显的抑制性信号。近年研究发现，SIRPα作为CD47的胞外受体，在巨噬细胞对肿瘤细胞的清除过程中发挥着重要作用。

  CD47，又称整合素相关蛋白(integrin-associated protein , IAP) , 也属于免疫球蛋白( Ig)超家族的成员。最初从人胎盘与整合素αⅤβ3 共纯化而为人们所认识。它是一种广泛表达的抗原 ,存在于所有组织的不同细胞上。这种跨膜蛋白包含Ⅴ型Ig样胞外结构域，高度疏水的五次跨膜区以及胞浆区。CD47最初是作为整合素依赖的白细胞，对细胞外基质蛋白反应进行调节而发挥作用。最经典的确定CD47 在调节吞噬作用的证据来源于：将CD47敲除红细胞（RBCs）移植入正常小鼠体内后很快被巨噬细胞从血液中清除，表明RBC表面的CD47与巨噬细胞表面的SIRPa结合可能在缓冲巨噬细胞对自身细胞清除中具有重要作用。

巨噬细胞的吞噬作用是肿瘤免疫监视的重要调节因素。最近的研究表明，在急性髓细胞白血病（AML）、急性淋巴细胞白血病（ALL）及非何杰金氏淋巴瘤（NHL）等恶性血液系统肿瘤病中，大量的白血病细胞及白血病干细胞（LSC）CD47表达显著上调，并可通过与SIRPa间的相互作用，阻止白血病细胞被宿主的先天免疫系统清除。这也是白血病耐药、复发的重要原因之一。而通过靶向性的CD47单克隆抗体阻断CD47-SIRPα间的作用，可以促进巨噬细胞对白血病细胞及LSC的吞噬作用，且不会减少正常的造血干细胞，对于白血病的治疗有着重要的临床意义。

本发明基于CD47-SIRPα在调节吞噬中的重要作用，表达了可溶性的SIRPα胞外段蛋白，与巨噬细胞上的SIRPα竞争结合白血病细胞上CD47，从而促进巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。

发明内容

本发明的目的，是提供一种白血病干细胞靶向可溶性蛋白TrxHis-hSIRPα，该蛋白可以结合于白血病细胞及白血病干细胞表面，有效地增强巨噬细胞对白血病干细胞的吞噬作用。

 本发明的技术方案是：一种白血病干细胞靶向可溶性蛋白TrxHis-hSIRPα，其特征是：它由人SIRPα蛋白胞外段和融合TrxHis的表达标签组成；其中hSIRPα蛋白胞外段是hSIRPα第26~370位氨基酸。

所述的hSIRPα第26~370位氨基酸包含与CD47结合的IgV样结构域；所述的融合的TrxHis表达标签是该可溶性蛋白的氨基末端。其中，氨基酸序列是No1，并由No2的核酸序列编码。

No1：TrxHis-hSIRPα的氨基酸序列