[发明专利]从鸡蛋清中联合提取多种蛋白质的方法

权利要求书

1.一种从鸡蛋清中联合提取多种蛋白质的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：

(1)新鲜鸡蛋清用等体积20～100mM氯化钠溶液稀释后混匀，调节pH值至5.0～8.0，得到处理好的蛋清稀释液；

(2)向蛋清稀释液中，边搅拌边加入聚乙二醇8000至其在蛋清稀释液中质量百分比浓度为2～6％，充分搅拌2～12小时后离心分离，得到沉淀A和上清A，在上清A中继续添加聚乙二醇8000至其在上清A中质量百分比浓度为8～12％，充分搅拌2～12小时后离心，得到沉淀B和上清B，上清B中再继续添加聚乙二醇8000至其在上清B中质量百分比浓度为14～18％，充分搅拌2～12小时后离心，得到沉淀C和上清D；

(3)将沉淀A悬浮于200～800mM氯化钠溶液中，充分搅拌悬浮4～24小时后离心，所得沉淀A1悬浮于蒸馏水中，充分搅拌后离心，再悬浮于蒸馏水中并离心一次，以洗去氯化钠，收集沉淀，即得卵粘蛋白；

(4)沉淀B、C和上清D分别使用Q Sepharose FF阴离子交换层析进行分离，然后分别用氯化钠溶液分步洗脱，所得各洗脱峰分别收集，透析后冷冻干燥得到多个待鉴定的蛋白质产品；

(5)对多个待鉴定的蛋白质产品进行取样，并经SD S-聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定后，合并相同蛋白质产品，即得溶菌酶、卵转铁蛋白、卵清蛋白和卵黄素蛋白。

2.根据权利要求1所述从鸡蛋清中联合提取多种蛋白质的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的用氯化钠溶液分步洗脱为用含有0.05～0.12M、0.15～0.25M和0.28～0.50M氯化钠的Tris-HCl缓冲液以相同流速进行分步洗脱。

3.根据权利要求2所述从鸡蛋清中联合提取多种蛋白质的方法，其特征在于：所述Tris-HCl缓冲液的pH为7.0～8.5，浓度为10～100mM，所述含氯化钠的Tris-HCl缓冲液的流速为2.0～3.0mL/min。

4.根据权利要求1或2或3所述从鸡蛋清中联合提取多种蛋白质的方法，其特征在于：所述步骤(2)向蛋清稀释液中，边搅拌边加入聚乙二醇8000至其在蛋清稀释液中质量百分比浓度为2.7～4.5％，充分搅拌2～4小时后离心分离，得到沉淀A和上清A，在上清A中继续添加聚乙二醇8000至其在上清A中质量百分比浓度为8.6～10.0％，充分搅拌2～4小时后离心，得到沉淀B和上清B，上清B中再继续添加聚乙二醇8000至其在上清B中质量百分比浓度为14.8～16.3％，充分搅拌2～4小时后离心，得到沉淀C和上清D。

5.根据权利要求2所述从鸡蛋清中联合提取多种蛋白质的方法，其特征在于：所述步骤(4)中的用氯化钠溶液分步洗脱为用含有0.07～0.09M、0.16～0.21M和0.29～0.40M氯化钠的Tris-HCl缓冲液以相同流速进行分步洗脱。