[发明专利]一种(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法

权利要求书

1.一种(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以4-氯-3-羰基丁酸乙酯为底物，使该底物在生物催化剂和氢供体的存在下发生不对称还原反应生成(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯，其特征在于：所述生物催化剂为酮还原酶KRED102，所述氢供体为异丙醇，所述不对称还原反应在pH为5.0~9.0的水相缓冲液中进行，并且反应体系中添加有聚乙二醇400 作为底物分散剂以及二价金属离子作为酶活力增强剂。

2.根据权利要求1所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：反应起始时的反应体系中，4-氯-3-羰基丁酸乙酯的浓度为1%~30% (w/v)，酮还原酶KRED102的浓度为0.01%~0.8% (w/v)，异丙醇的浓度为1%-20%，聚乙二醇400的浓度为10%~70% (v/v)，所述二价金属离子的浓度为0.1~20 mM。

3.根据权利要求2所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：反应起始时的反应体系中，4-氯-3-羰基丁酸乙酯的浓度为10%~20%(w/v)。

4.根据权利要求2所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：反应起始时的反应体系中，酮还原酶KRED102的浓度为0.02%~ 0.1%(w/v)。

5.根据权利要求2所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：反应起始时的反应体系中，异丙醇的浓度为5%~10%(v/v)。

6.根据权利要求2所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：反应起始时的反应体系中，聚乙二醇400的浓度为40%~60%(v/v)。

7.根据权利要求2所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：反应起始时的反应体系中，二价金属离子的浓度为0.5~2 mM。

8.根据权利要求1或2所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：所述的水相缓冲溶液为磷酸盐缓冲液或Tri-HCl缓冲液。

9.根据权利要求1或2所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：所述制备方法的实施过程如下：在反应容器中加入水相缓冲溶液，依次加入底物4-氯-3-羰基丁酸乙酯，异丙醇，酮还原酶KRED102，聚乙二醇400，含有所述二价金属离子的无机盐，于温度20℃~40℃下，搅拌反应，利用气相色谱监测反应的转化率，至转化率达到80%~100%，加入乙酸乙酯多次萃取，合并有机相并蒸干，即得(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯产品。

10.根据权利要求9所述的(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其特征在于：所述的二价金属离子为钙离子或镁离子，含有所述二价金属离子的无机盐为氯化钙或氯化镁。