[发明专利]一种荧光假单胞菌重组蛋白疫苗及其制备

说明书

技术领域

本发明涉及分子疫苗学领域，具体的说是一种荧光假单胞菌重组蛋白疫苗及其制备方法。 

背景技术

荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)是一种革兰氏阴性杆菌，能够感染多种养殖经济鱼类，包括鲤鱼、罗非鱼、牙鲆等。荧光假单胞菌感染鱼类诱发一种被成为“红皮病”的疾病，其症状为体表出血和溃烂，从而给产业造成严重的经济损失。目前，荧光假单胞菌病害防治尚无有效的疫苗，主要依赖抗生素类药物的使用。因此，针对荧光假单胞菌的疫苗研发在我国亟需开展。重组亚单位疫苗是一种常见的疫苗形式，其主要原理是利用病原自身的一个抗原，经异源表达后作为疫苗应用，从而起到对病原的免疫保护作用。我们在前期研究中发现荧光假单胞菌的一个外膜蛋白P478具有良好的免疫原性，在此基础上将其构建成了一个重组亚单位疫苗。 

发明内容

本发明目的在于提供一种荧光假单胞菌重组蛋白疫苗及其制备。 

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为： 

一种荧光假单胞菌重组蛋白疫苗，疫苗抗原为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示。所述重组蛋白疫苗为含有列表SEQ ID No.1的真核重组表达质粒pE478。所述重组蛋白疫苗为含有列表SEQ ID No.1的真核重组表达质粒pE478转化大肠杆菌表达的重组蛋白。 

荧光假单胞菌重组蛋白疫苗的制备方法以荧光假单胞菌TSS1为模板，采用F1/R1为引物进行PCR扩增，PCR产物与载体pEASY-E2连接，连接液转化入大肠杆菌DH5α，筛选质粒pE478，质粒pE478转化大肠杆菌BL21(DE3)表达的含序列表SEQ ID No.1中的氨基酸的重组蛋白；所述引物为F1：5’-CATATGAACGACAACACTCTTTATG-3’；R1：5’-CTCGAGGAAGTTGGCCTCCAGC-3’。 

荧光假单胞菌重组蛋白疫苗的应用，所述重组蛋白疫苗在制备具有预防和治疗荧光假单胞菌疫苗制剂中的应用 

本发明具有如下优点： 

1.高保护性。本发明的疫苗对荧光假单胞菌的免疫保护效率达81％。 

2.无需商业化佐剂。 

附图说明

图1为本发明实施例提供的纯化的疫苗蛋白(泳道2)。泳道1，分子量标准。 

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。实施例旨在对本发明进行举例描述，而非以任何形式对本发明进行限制。在本发明实施例中所涉及到的常规性实验方法均采用如下方法： 

1.质粒提取、DNA(PCR)产物纯化皆使用“天根生化科技(北京)有限公司”的相应试剂盒。 

2.质粒、DNA连接液转化进入大肠杆菌皆用Hanahan方法(Sambrook and Russell：Molecular Cloning：A Laboratory Mannual.Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001)； 

3.所有限制性内切酶和连接酶皆购自于“北京，纽英伦生物技术有限公司”。 

实施例1 

荧光假单胞菌疫苗抗原为序列表SEQ ID No.1中的氨基酸序列所示(参见序列表1)。 

序列表1 

MSVRDLHVNDNTLYALLLASGLGGFAPLVLADDAQDVGSVNIAGKQTLGSGHMILEESAKARSTVTKQAMDEMSATANAI 

DKLKYTPGINVSSDDASGTSGTNFTMRGMSSDQVGVSVDGVPINDSGNYSVYSNQLGDPENLAKVFATQGSSEADGPHIG 

SSGGNIGMITIRPTKDAGVFAKQIVGANALRKTFVRANTGDLGGLKTWVSASHLEGDKWRGKGTLRSDKIEWSSLFEGDN 

GNSTLATIKYNKQENYNYNSLSKAQFDTEGRRKDYAQSPVYKAGLLSASYKLNRNPFESVNATLTQRWQLQDNLSLTLTP 

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