[发明专利]选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂及其制备方法。具体地说是在使用混合抑菌剂两性霉素B、萘啶酮酸、万古霉素、TMP基础上添加乳酸链球菌素（Nisin）抑制杂菌生长。本发明还涉及该混合抑菌剂的制备方法。

 

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是一种弯曲状的革兰阴性杆菌，是引起消化道炎症、溃疡、胃黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤的主要致病菌，与胃癌的发生直接相关，被国际卫生组织列为一级致癌因子。全世界约50％人群的胃粘膜有Hp感染，如何根除HP所致的消化系统疾病已成为消化界学者关注的焦点。HP的生长条件要求非常苛刻，培养过程繁琐、培养设备复杂、昂贵、培养技术要求高，杂菌生长多，给研究HP带来很大的困难。

 目前对于幽门螺杆菌培养方法报道较多，HP的分离培养阳性率与培养基、气体、仪器、操作技术等有关。HP生长营养要求高，在一般的培养基上不生长， 必须在营养丰富且加有血液的培养基上才可生长。常用的有血培养基：哥伦比亚琼脂(CBA)、BHI、巧克力琼脂、skirrow、空肠弯曲菌培养基等基础上加5％-10％绵羊血(马血或兔血)、两性霉素B、多粘菌素B、盐酸万古霉素、TMP以抑制杂菌生长。血液易污染、不便保存、来源受限，目前已研制出无血培养基：用环糊精，卵黄、水解酪蛋白、西红柿汁、酵母提取物和马血清替代血液的HP分离培养基。不同的培养基其分离培养效果不同：初步分离胃黏膜标本的HP阳性率：含7％脱纤维鲜马血的 BHI 培养基为96％，卵黄琼脂为64％，含环糊精的CBA血琼脂为32％。液体培养基常常由于气体条件难于满足而对培养设备要求高，培养过程复杂。

目前HP分离培养基也从无血代替有血、从固体往液体发展。  

HP生长的气体条件苛刻，在空气中、无氧条件都不生长，一般采用：5％O ₂、 10％CO₂、85％N₂，有些地区还要加5％H₂。湿度约为90％。最适生长温度为37℃，低于27℃高于42℃均不生长。HP在协迫条件下容易发生变异：菌体从弯曲杆菌变为球型、丝状型。球型变一般呈非可培养状态，L型、丝状体一般难于再培养。协迫条件包括：培养时间延长、培养基水份、营养成分损失、培养基在空气中放置时间过长、气体条件不适、温度不适、抗生素作用等不适宜HP生长的条件。 

其培养效果取决于气体、湿度、温度是否最适宜HP生长。

经查阅文献，对于分离培养幽门螺旋杆菌常用的抑菌剂为单一的两性霉素B、多粘菌素B、盐酸万古霉素、TMP或其组合物。

    乳酸链球菌素（Nisin）又称乳链菌肽或尼生素，是从乳酸链球菌发酵产物中提取的一类多肽类化合物, 由34个氨基酸残基组成。它能有效地抑制致使食品腐败的革兰氏阳性菌的生长和繁殖，特别是对耐热性芽孢杆菌、肉毒梭菌、李斯特菌及其所产生的芽孢有强烈的抑制效果，可用于肉制品、乳制品、植物蛋白食品、罐装食品等的防腐保鲜。由于乳酸链球菌素是一种多肽，进入人体后易被植物蛋白酶分解，因此是一种安全、无毒、高效的天然食品防腐剂。

对于Nisin（乳酸链球菌素）的应用，大多数文献报道都用于食品防腐，至今未见用于幽门螺旋杆菌杂菌抑制剂的报道。

本发明是在使用混合抑制剂两性霉素B、萘啶酮酸、万古霉素、TMP基础上添加乳酸链球菌素抑制杂菌生长。

  

发明内容

针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂，以解决幽门螺杆菌培养生长条件要求苛刻，培养过程繁琐、培养技术要求高，杂菌生长多的问题。

本发明的另一目的是提供所述选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂制备方法。

实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂，其配方组成为：万古霉素3～50 mg/l，萘啶酮酸5～10.0 mg/l，TMP3～5.0 mg/l，两性霉素1～2.0 mg/1, Nisin 8～10 mg/1。

进一步，所述选择性培养幽门螺旋杆菌的混合抑菌剂的制备方法，主要包括下列步骤：

1）培养基的配制：

培养基配方:930 ml/l脑心浸液培养基，80 ml/l胎牛血清，1.0 g/lβ-CD，0.04 g/l TTC（四氮唑红）,pH 7.2-7.4；