[发明专利]间皮瘤诊断剂、间皮瘤诊断试剂盒和间皮瘤诊断方法

说明书

本申请是申请日为2007年12月7日，申请号为200780045187.5(国际申请号为PCT/JP2007/001373)，名称为“间皮瘤诊断剂、间皮瘤诊断试剂盒和间皮瘤诊断方法”的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及可用于间皮瘤早期诊断的间皮瘤诊断剂、间皮瘤诊断试剂盒和间皮瘤诊断方法。

背景技术

近年来，具有接触石棉经历的人高频率地发生间皮瘤已经发展成社会问题。间皮瘤有恶性的也有良性的，多数恶性间皮瘤患者具有石棉接触经历，从接触石棉起经过30-35年的长潜伏期而发生恶性间皮瘤。因此，不能否认今后存在间皮瘤患者增加的可能性。

此外，间皮瘤是难以早期发现的疾病，现在通过使用MRI、CT等的方法来诊断间皮瘤，但这些方法难以进行早期诊断，存在的问题是：很多情况下，诊断出间皮瘤时疾病已经处于进展之中。仅仅考虑到这种情况，也迫切希望本疾病的早期诊断，但是目前为止还没有发现有效的早期诊断标志物。

目前为止，已经发现的间皮瘤相关的标志物包括被称作Erc、MPF和间皮素(Mesothelin)的蛋白。这其中的来龙去脉如下。

首先，1994年Yamaguchi等报导：从人胰脏癌细胞HPC-Y5上清纯化出了称作MPF(Megakaryocyte potentiating factor，巨核细胞强化因子)的蛋白(文献1)，而且1995年Kojima等报导：从人胰脏癌细胞HPC-Y5的cDNA克隆化了MPF(文献2)。

其后，Chang等制作了与在间皮细胞、卵巢癌和间皮瘤的表面表达的40kDa表位反应的单克隆抗体K1，在使用该抗体寻找编码其抗原蛋白的基因时，分离出了具有编码69kDa蛋白的1884bp开放阅读框(open reading frame)的基因。然后Chang等又阐明：该69kDa蛋白为上述40kDa蛋白的前体，该69kDa蛋白因磷脂酰肌醇特异性磷脂酶(PI-PL)的作用而被切断，从而在细胞表面表达40KDa蛋白。这以后，Chang等将该69kDa蛋白命名为间皮素(文献3)，接下来又阐明：上述的MPF与间皮素是同一蛋白。

另一方面，Scholler等免疫卵巢癌细胞制作了单克隆抗体OV569，并对单克隆抗体OV569所识别的蛋白进行了检索，结果发现该蛋白具有与间皮素的膜结合区域相同的序列，其分子量为42-45kDa，并将其称作可溶性间皮素(Soluble member of mesothelin)。研究表明：该蛋白在中途发生了框移突变，其结果是变成C末端区域的GPI锚定部分不同的序列，因此变为可溶性。而且，使用与OV569识别相同蛋白的另一单克隆抗体4H3构建了夹心EIA(Sandwich EIA)测定系统，发现对卵巢癌患者血清的测定结果显示出比健康正常人高的上述蛋白的值(文献4)。而且，Robinson等报导：使用该测定系统对间皮瘤患者进行了测定，结果显示出比健康正常人高的上述蛋白的值(文献5)。

作为本发明人的樋野等通过长年对疾病模型动物进行研究，搜寻了肾癌发病模型Eker大鼠的原因基因。其结果，发现了与正常肾组织相比、在Eker大鼠肾癌来源的细胞系中显示高表达的基因，并将其中的1个命名为Erc。而且，对大鼠Erc的人同源物进行搜寻的结果表明：人的MPF与大鼠Erc具有56.1％的同源性(文献6、7)。

根据以上情况可以认为：(1)人Erc、MPF和间皮素(以下将它们称为“Erc/MPF/间皮素”)是全长622氨基酸的糖蛋白，其第290-295位氨基酸具有RPRFRR序列，因而受到费林(Furin)样蛋白酶的加工，裂解为31kDa和40kDa的片段；(2)40kDa片段的C末端侧区域因其C末端包含GPI锚定区域而以与细胞膜结合的形式保留下来，而N末端侧的31kDa片段以可溶性蛋白的形式分泌(以下将其称作“31kDa分泌型Erc/MPF/间皮素”)；(3)此外，结合在细胞膜上的40kDa片段的C末端侧也可因磷脂酰肌醇-特异性磷脂酶C(phosphatidiylinositol-specific phospholipase C：PI-PLC)处理而从细胞中释放出来；等等。

有报导称：这些通过不同方法鉴定出的Erc/MPF/间皮素不仅在正常间皮细胞和间皮瘤中强表达，而且还存在于间皮瘤患者的血液中。然而，凭借这些认识还无法明确在间皮瘤中分泌什么类型的Erc/MPF/间皮素。