[发明专利]鼠伤寒沙门氏菌的特异性FQ-PCR检测方法有效
| 申请号： | 201210045529.6 | 申请日： | 2012-02-21 |
| 公开（公告）号： | CN102618635A | 公开（公告）日： | 2012-08-01 |
| 发明（设计）人： | 程安春;黄静玮;汪铭书;陈孝跃 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/10;G01N21/64 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 伤寒 沙门氏菌 特异性 fq pcr 检测 方法 | ||
1.一种鼠伤寒沙门氏菌的特异性FQ-PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，筛选出鼠伤寒沙门氏菌全基因组DNA中的保守且特异性的STM4493基因，其核苷酸序列由SEQ ID NO：1定义，并根据其序列设计扩增引物对和探针；引物对和探针序列如下：
上游引物：5-’CCGCGTTTTTGTATTGAAAGTTATC-3’(SEQ ID NO：2)
下游引物：5-’AAACATCATGAACGGCCTGG-3’(SEQ ID NO：3)
探针：5-’CAGCCAAAACATCAGCAGGCGATCA-3’(SEQ ID NO：4)
步骤二，提取样品DNA；
步骤三，对样品DNA进行FQ-PCR检测；FQ-PCR反应体系如下：依次加入10×PCR反应缓冲液2.5μL，25mmol/L的Mg2+2.0μL，2.5mmol/L的dNTP1.0μL，5μM引物对1μL，5μM探针0.5μL，Taq酶1U，模板溶液0.5～2μL，最后用双蒸水补至25μL；扩增参数具体为：95℃预变性5min；之后开始扩增循环，每个循环的程序为：95℃变性30s，51℃退火30s，72℃延伸30s；共45个循环；最后72℃延伸10min，降温至16℃，结束；
步骤四，通过FQ-PCR仪自带软件自动分析读取FQ-PCR检测结果，判断样品是否含鼠伤寒沙门氏菌；所述判断具体为：若出现Ct＜35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则说明样品中含鼠伤寒沙门氏菌；若未出现Ct＜35且呈对数增长的特异性扩增曲线，则说明样品中不含鼠伤寒沙门氏菌。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于四川农业大学，未经四川农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201210045529.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
