[发明专利]用于检测β-胡萝卜素类色素的单克隆抗体及酶联免疫方法与试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种能识别β-胡萝卜素类色素的单克隆抗体和一种用于检测β-胡萝卜素类色素的酶联免疫方法及试剂盒。

背景技术

β-胡萝卜素类色素有β-阿朴-8’-胡萝卜素醛、β-阿朴-8’-胡萝卜素酸乙酯、叶黄素、辣椒红、斑蝥黄、虾青素等。

目前，对β-胡萝卜素类物质的检测方法主要是仪器检测法，如纸层析法、薄层层析法、柱层析法、分光光度法、高效液相色谱或液质联用法。这些检测方法需要配备昂贵的仪器和专业性强的操作人员，样品的前处理复杂，检测时间长，不利于大批量样品的筛选，不能在现场进行快速的检测。酶联免疫检测方法(ELISA)是利用免疫反应(即抗原-抗体结合反应)的高度特异性和酶促反应的高度敏感性对药物进行定性和定量分析的一种综合性检测技术。它具有操作简便、高通量、高灵敏度、低费用等优点，能克服仪器检测方法的不足。目前，国内外没有针对β-胡萝卜素类的ELISA检测方法的文献报道。

对于小分子化合物ELISA检测方法的建立，小分子化合物的抗体制备是核心部分，而合理设计半抗原又是关键。半抗原的化学结构不同，连接到载体蛋白上的化学位点就不同，交联臂的化学性质也不同，而这是影响小分子化合物抗体性质的决定性因素。因此对小分子化合物进行化学结构改造，合理设计半抗原，将半抗原连接到载体蛋白上，是该发明的核心。

申请人检索到一篇申请号为201010140887.6的发明专利，该专利提供了一种氧化α-紫罗酮和β-紫罗酮的方法，但是并没有将其作为半抗原合成免疫原及应用于酶联免疫检测。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种能识别β-胡萝卜素类色素的单克隆抗体。

本发明的第二个目的是利用该单克隆抗体，建立一种能检测β-胡萝卜素类色素的ELISA方法。

本发明的第三个目的是提供一种检测β-胡萝卜素类色素的酶联免疫试剂盒。

本发明的第四个目的是提供所述单克隆抗体在制备检测β-胡萝卜素类色素的酶联免疫试剂盒中的应用。

本发明的第五个目的是提供含有所述单克隆抗体的试剂盒在动物组织β-胡萝卜素类色素残留检测中的应用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种能识别β-胡萝卜素类色素的单克隆抗体，它是由保藏号为CCTCC NO：C201146杂交瘤细胞DCC/C11所分泌的。

所述胡萝卜素类色素指的是斑蝥黄、β-胡萝卜素、β-阿朴-8’-胡萝卜素醛、叶黄素、辣椒红素、β-紫罗酮酸。

所述杂交瘤细胞DCC/C11保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC NO：C201146。

所用的免疫原是通过半抗原β-紫罗酮酸与牛血清白蛋白偶联制备得到的。

进一步，本发明提供了一种检测β-胡萝卜素类色素的酶联免疫方法，包括免疫原、包被原、抗体的制备以及样品的处理和检测，其步骤如下：

(1)将半抗原β-紫罗酮酸与牛血清白蛋白(BSA)偶联得到免疫原；

(2)将半抗原4-氧代-β-紫罗酮酸与卵清蛋白(OVA)偶联得到包被原；

(3)利用步骤(1)的免疫原免疫小鼠，通过细胞融合与筛选得到保藏号为CCTCC NO：C201146的杂交瘤细胞DCC/C11；

(4)用保藏号为CCTCC NO：C201146的杂交瘤细胞DCC/C11制备单克隆抗体；

(5)用步骤(2)的包被原包被固相载体；

(6)将待测样品用体积比为乙酸乙酯∶氢氧化钠(2％)＝2∶1的混合溶液提取，经乙酸乙酯萃取和氮气吹干后，残渣用样品稀释液溶解得到待测物；

(7)对步骤(6)的待测物进行酶联免疫检测，

其中：

样品稀释液的组分及配比为：NaCl 8.0g，KH₂PO₄ 0.2g，Na₂HPO₄·12H₂O 2.9g，KCl 0.2g，N’，N’-二甲基乙酰胺20mL，加双蒸水至1000mL。

本发明以上述单克隆抗体和包被原作为核心试剂与常规的其他试剂组合，制成了能检测β-胡萝卜素类色素的酶联免疫试剂盒，结合上述酶联免疫方法，实现了对β-胡萝卜素类色素的酶联免疫检测。

本发明的有益效果是：