[发明专利]检测芜菁花叶病毒的一步多重RT-PCR法及其专用引物

权利要求书

1.一种检测芜菁花叶病毒的引物组，为如下引物组C、引物组A或引物组B：

所述引物组C包括引物对a和引物对b；

所述引物组A包括引物对a；

所述引物组B包括引物对b；

所述引物对a由序列表中序列3所示的DNA分子和序列表中序列4所示的DNA分子组成；

所述引物对b由序列表中序列5所示的DNA分子和序列表中序列6所示的DNA分子组成。

2.根据权利要求1所述的引物组，其特征在于：

所述引物组C还包括随机引物和Oligo d(T)18；

所述引物组A还包括随机引物和/或Oligo d(T)18；

所述引物组B还包括随机引物和/或Oligo d(T)18。

3.根据权利要求1或2所述的引物组，其特征在于：

所述引物组C由所述引物对a、所述引物对b、所述随机引物和所述Oligo d(T)18组成；

所述引物组A由所述引物对a、所述随机引物和/或所述Oligo d(T)18组成；

所述引物组B由所述引物对b、所述随机引物和/或所述Oligo d(T)18组成。

4.一种检测芜菁花叶病毒的PCR试剂，为如下1)-3)中的任意一种：

1)由权利要求1-3中任一所述的引物组中的所述引物组C、dNTPs、反转录酶、DNA聚合酶及PCR缓冲液组成；

2)由权利要求1-3中任一所述的引物组中的所述引物组A、dNTPs、反转录酶、DNA聚合酶及PCR缓冲液组成；

3)由权利要求1-3中任一所述的引物组中的所述引物组B、dNTPs、反转录酶、DNA聚合酶及PCR缓冲液组成。

5.根据权利要求4所述的PCR试剂，其特征在于：

所述反转录酶为M-MLV；

所述各引物组中的所述引物对a和所述引物对b的各条引物在对应的所述PCR试剂中的终浓度均为0.125μmol/L；

所述引物组A或所述引物组B中的所述随机引物在对应的所述PCR试剂中的终浓度均为1.25μmol/L；

所述引物组A或所述引物组B中的所述Oligo d(T)18在对应的所述PCR试剂中的终浓度均为0.625μmol/L。

6.一种检测芜菁花叶病毒的试剂盒，包括权利要求4或5所述的PCR试剂。

7.权利要求1-3任一所述的引物组、权利要求4或5的所述的PCR试剂或权利要求6所述的试剂盒在鉴定或辅助检测芜菁花叶病毒中的应用；

或权利要求1-3任一所述的引物组、权利要求4或5的所述的PCR试剂或权利要求6所述的试剂盒在制备鉴定或辅助检测芜菁花叶病毒产品中的应用；

或权利要求1-3任一所述的引物组、权利要求4或5的所述的PCR试剂或权利要求6所述的试剂盒在鉴定或辅助检测待测植物是否感染芜菁花叶病毒中的应用；

所述待测植物具体为萝卜、甘蓝或四月慢油菜。

8.一种鉴定或辅助检测待测植物是否感染芜菁花叶病毒的方法，包括如下步骤：以待测植物组织的RNA提取物作为模板，分别用权利要求4或5的所述PCR试剂或权利要求6所述试剂盒中的所述的引物组C、所述的引物组A或所述的引物组B进行一步RT-PCR扩增，得到扩增产物，

检测扩增产物，

若所述引物组C扩增产物的大小为156bp和/或377bp，则待测植物为或候选为感染芜菁花叶病毒；

若所述引物组A扩增产物的大小为156bp，则待测植物为或候选为感染芜菁花叶病毒；

若所述引物组B扩增产物的大小为377bp，则待测植物为或候选为感染芜菁花叶病毒。