[发明专利]珙桐PCR鉴定用引物及PCR鉴定方法有效
| 申请号： | 201210024404.5 | 申请日： | 2012-02-03 |
| 公开（公告）号： | CN102559908A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | 许瑾;李明福 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王朋飞;王加岭 |
| 地址： | 100025 *** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 珙桐 pcr 鉴定 引物 方法 | ||
1.珙桐PCR鉴定用引物，其特征在于，其能对珙桐的叶绿体atpF-atpH基因进行扩增，生成珙桐特异性扩增片段。
2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，所述引物核苷酸序列为：
正向：5’-GGTTACATTTTTCATATGATCTCCG-3’
反向：5’-ATTTTATTGCCTTGGATG-3’。
3.权利要求1或2所述的引物在鉴定珙桐种质资源中的应用。
4.一种珙桐PCR鉴定方法，该方法以样品总DNA为模板，利用权利要求1或2所述的引物进行PCR扩增，扩增产物经限制性内切酶进行酶切，反应结束后根据琼脂糖凝胶电泳判定结果。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，25μL PCR反应体系为：
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR的反应条件为：预变性94℃、5min；再经94℃变性30s，51℃退火40s，72℃延伸40s，35个循环；最后72℃延伸10min。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，20μL酶切反应体系为：PCR产物10μL，10×buffer 2μL，内切酶0.5μL，ddH2O7.5μL；酶切反应条件为37℃，反应2h。
8.如权利要求4所述的方法，其特征在于，用4％琼脂糖凝胶进行电泳。
9.如权利要求4所述的方法，其特征在于，样品总DNA来自珙桐的种子、叶片、珙桐加工品以及珙桐种质资源。
10.一种珙桐鉴定用试剂盒，其包括，权利要求1或2所述的引物。
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