[发明专利]骨质疏松症易感基因无创检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体涉及一种女性骨质疏松症易感基因检测试剂盒，根据检测结果从基因层面评估女性骨质疏松症易感的风险级别，并作为预防骨质疏松症的建议指导。

背景技术

骨质疏松症是一种以骨量降低和骨组织微结构破坏为特征，导致骨脆性增加和易于骨折的代谢性骨病，它是最为严重的退行性疾病之一。骨质疏松症易导致骨痛、骨病及骨折，直接影响中老年人的生活质量，目前已成为公众健康问题。女性发生骨质疏松症的危险性高于男性，虽然骨量丢失大多开始于绝经前，但在围绝经期由于雌激素水平下降，也可造成骨质疏松加速。因此，加强对围绝经期妇女骨质疏松症防治的研究，对于提高其生活质量具有重要意义。

通过研究发现，编码白细胞介素6(IL-6)、维生素D受体(VDR)、肿瘤坏死因子(TNF-a)、骨保护素(OPG)四种基因的单核苷酸位点多态性与女性骨骼健康有着非常密切的关系。

白细胞介素6(IL-6)是一种多功能的细胞因子，调节骨吸收，刺激造血功能，诱导浆细胞发育，还影响IL-4的产生，并加强其他细胞因子的作用，刺激骨髓的多核细胞呈破骨细胞表现型。IL-6是由成骨细胞和单核细胞合成的骨吸收细胞因子，作用于破骨细胞前体刺激其增殖和分化，参与骨质疏松症的发病。在骨重建过程中，成骨细胞起着非常重要的作用，IL-6可以通过多种途径对成骨细胞的增殖分化和凋亡起调节作用。

维生素D受体(VDR)是一种介导1，25-(OH)2-D3发挥生物效应的生物大分子，为类固醇激素/甲状腺激素受体超基因家族的成员。VDR在维持机体钙磷代谢，调节细胞增殖、分化等方面起着重要作用。人来的VDR基因位于12号染色体长臂1区3带(12q13)上。目前为止，该基因在多个种族中已被发现呈多态性分布。由于VDR基因在调节钙磷代谢和免疫应答过程中起着重要作用，VDR基因多态性与维生素D功能相关疾病的易感性研究，近来已成为研究热点。通过研究证实，VDR基因上Bsm I(rs731236)、TaqI(rs1544410)多态性与女性骨质疏松症发病相关。

肿瘤坏死因子(TNF-a)是十分重要的破骨细胞激活因子，是一种强有力的骨吸收诱导剂，可使破骨细胞活性增强。它不能够促进破骨前体细胞增殖、分化，而且对成骨细胞也有多种效应。TNF-a基因上G-308A单核苷酸位点多态性被认为与骨疾病的发生密切相关。

骨保护素(OPG)是肿瘤坏死因子受体(TNFR)家族成员，人类OPG基因位于染色体8q23-q24，OPG蛋白由401个氨基酸残基组成，常以同二聚体形式分泌到胞外。OPG在人体的骨组织中有较高表达，主要由成骨细胞及骨髓基质细胞分泌。在骨组织中，OPG作为一种诱饵受体，能与RANKL或肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体竞争性结合，以阻断RANKL与RANK结合，发挥抑制破骨细胞分化、成熟，诱导破骨细胞凋亡的作用。大量研究证实，骨保护素(OPG)Lys3Asn单核苷酸多态与骨质疏松症的发病和进展过程中骨代谢更新密切相关。

因此，建立简单、快速的女性骨质疏松症易感人群的筛查方法，能够检测出女性在骨质发育相关的基因单核苷酸位点基因型，及时筛查出易患女性骨质疏松症的高危人群，从而提早预防和治疗，这对于降低女性骨质疏松症、女性骨折的发病率有非常重要的意义。

发明内容

基于IL-6基因G-174C(rs1800795)，VDR基因上Bsm I(rs731236)、TaqI(rs1544410)，TNF-a基因上G-308A(rs1800629)，OPG基因上Lys3Asn(rs2073618)的5个单核苷酸多态性位点基因型可用来评估女性骨质疏松症易患风险级别的功能基础上，本发明提供一种女性骨质疏松症易感基因检测试剂盒。

该试剂盒包括：

检测IL-6基因G-174C(rs1800795)，VDR基因上Bsm I(rs731236)、TaqI(rs1544410)，TNF-a基因上G-308A(rs1800629)，OPG基因上Lys3Asn(rs2073618)的5个单核苷酸多态性位点基因型的特异性引物对及DNA测序引物；

PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、反应缓冲液、ddH2O等)；

PCR产物纯化组件(包括SAP酶、ExoI酶、ddH2O等)；

DNA测序反应组件(包括BigDye mix，EDTA溶液、100％乙醇溶液、70％乙醇溶液、HIDI溶液、ddH2O等)。