[发明专利]分枝杆菌最低抑菌浓度检测系统的制备方法

权利要求书

1.一种分枝杆菌最低抑菌浓度检测系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将配制好的50-200微升、浓度为0.01-400微克/毫升的含药液体培养基与5-100微升1×10³-1×10⁸个/毫升的分枝杆菌菌液、5-50微升显色剂混合，在30-40摄氏度下恒温共培养3-14天后，进行显色检测，并根据显色检测结果，判定药物最低抑菌浓度，其中在混合后，所述显色剂的终浓度为0.08-10毫摩尔/升。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将5-50微升的中间电子受体与所述含药液体培养基、分枝杆菌菌液、显色剂混合，其中在混合后，所述中间电子受体的终浓度为10-200微摩尔/升。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述分枝杆菌为结核分枝杆菌复合群或非结核分枝杆菌。

4.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述分枝杆菌菌的制备为采用麦式比浊法或吸光度法获得一定浓度的菌液，按一定倍数进行稀释或不稀释后备用。

5.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述含药液体培养基的配制是按照倍比稀释法用液体培养基稀释药物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，在适当的培养载体中配制所述含药液体培养基，所述培养载体是不低于2行5列的微孔板、不低于500微升的离心管或不低于5毫升的试管。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述液体培养基为含有营养添加剂的无菌Middle brook 7H9液体培养基，或其他适合细菌、细胞培养的液体培养基。

8.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述药物为：异烟肼、利福平、链霉素、比嗪酰胺、乙胺丁醇、对氨基水杨酸、卡那霉素、阿米卡星、卷曲霉素、环丝氨酸、氧氟沙星、左氧氟沙星、乙硫异烟胺、丙硫异烟胺、莫西沙星、环丙沙星、加替沙星、司帕沙星、青霉素钠、头孢西丁、头孢噻肟、阿莫西林、美罗培南、亚胺培南、克拉维酸钾、红霉素、罗红霉素、克拉维酸、妥布霉素、强力霉素、甲硝唑、替硝唑、噻吩-2-羧酸酰肼、对硝基-苯丙酸钠、或动物、植物、微生物的提取物或发酵产物、化学合成的化学单体。

9.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，所述中间电子受体为：醌类衍生物；萘醌类衍生物；蒽醌类衍生物；吩嗪类衍生物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述中间电子受体为甲萘醌。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述中间电子受体为甲硫吩嗪或1-甲氧基-5-甲基酚嗪硫酸甲酯盐。

12.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述显色试剂为：刃天青、阿玛尔蓝、孔雀绿、硝酸还原试剂、或能产生水溶性甲臜的四唑盐类化合物。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述硝酸还原试剂为硝酸盐、氨基苯磺胺、或N-(1-萘)乙烯二胺盐酸盐。

14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述能产生水溶性甲臜的四唑盐类化合物为XTT或WST系列化合物。

15.根据权利要求1至3任一项所述的方法，其特征在于，所述所述显色检测的检测方法为在分光光度计、荧光检测仪中采用一定波长进行检测，或直接通过肉眼观察，通过所获得的吸光度值或相对吸光度值，或肉眼观察到颜色的明显改变情况，判定分枝杆菌的药物最低抑菌浓度值。