[发明专利]分泌抗喹诺酮类药物单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗喹诺酮类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。 

背景技术

氟喹诺酮类药物(Fluoroquinolones，FQs)是一类人工合成的广谱、高效的抗菌药物。作为兽药和饲料添加剂而大量应用于动物,导致其残留在动物可食性产品中。这类残留物可直接对人体造成危害：引起软骨毒性、关节疼痛和肿胀、皮肤过敏反应、白细胞和血小板减少、嗜酸细胞增多、溶血、肝肾损伤等。更严重的是低浓度的残留药物可能会对FQs类药物敏感的致病菌产生耐药性,从而间接威胁人类健康。为此许多国家对喹喏酮类抗生素制定了严格的限量标准，我国该类抗生素的最高残留限量：达氟沙星在 牛、羊、家禽肌肉中为200μg/kg、奶中为30μg/kg，二氟沙星在牛、羊、猪肌肉中为400μg/kg、家禽中为300μg/kg，恩诺沙星在牛、羊、猪、家禽肌肉中均为100μg/kg。 

目前采用的检测手段主要有微生物抑制分析法、荧光分光光度法、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱（GC）、薄层色谱和气质联用，液相色谱方法及质谱联用方法等。目前主要用GC或HPLC进行测定。这些方法虽然有较高的灵敏度，但需昂贵的实验仪器，操作复杂、费时费钱、不能高通量检测，故难以在基层普及应用。而用抗体为基础开发的免疫学检测方法及其试剂盒和试纸条能有效克服这些不足。 

目前国内外没有检测喹诺酮类药物残留的免疫试剂盒及试纸条，本发明专利应用竞争抑制ELISA原理，以喹诺酮类药物单克隆抗体为核心建立检测喹诺酮类药物残留的竞争ELISA方法，并组装成有自主知识产权、廉价、灵敏的喹诺酮类药物残留检测试剂盒，应用免疫胶体金的原理，以胶体金标记环丙沙星特异性单克隆抗体为核心研制喹诺酮类药物残留快速检测的高灵敏度的免疫试纸条。发明专利的单抗及其免疫学检测试剂盒和试纸条完全满足中国、欧盟、日本等地区对喹诺酮类药物残留的检测要求。喹诺酮残留的免疫学检测方法、免疫学试剂盒及免疫试纸条的国产化对保障我国食品安全及食品的出口创汇具有重要意义，可产生巨大的经济效益和社会效益。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种分泌抗喹诺酮类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗应用。 

分泌抗喹诺酮类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏号为CGMCC No. 5608，它能分泌抗喹诺酮类药物单克隆抗体； 

杂交瘤细胞株分泌抗喹诺酮类药物单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-7以上，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链，该单克隆抗体能与喹诺酮类药物环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、达氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、麻保沙星、沙拉沙星和双氟沙星有特异性免疫反应。

抗喹诺酮类药物单克隆抗体在食品中该类抗生素残留检测上的应用是以单克隆抗体为核心建立的各种免疫学检测方法及其试剂盒和试纸条。 

本发明提供的杂交瘤细胞株分泌的抗喹诺酮类药物单克隆抗体特异性强、灵敏度高，能满足开发免疫学检测方法及试剂盒的要求；以该发明提供的单抗为核心建立的检测食品中喹诺酮类药物残留的竞争ELISA方法及免疫学试剂盒和试纸条能特异、准确、灵敏、简单、快速、高通量地检测食品中喹诺酮类药物的残留。 

附图说明

图1是试纸条的特异性分析，每个样品的含量为100ppb； 

图2是试纸条的组织样品检测灵敏度分析；

图3是试纸条的蜂蜜样品检测灵敏度分析；

图4是试纸条的原奶样品检测灵敏度分析。

具体实施方式

分泌抗氟喹诺酮类药物单克隆抗体的杂交瘤细胞，于2011年11月28日，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏号为CGMCC No.5608，分类命名为：分泌抗氟喹诺酮类药物单抗杂交瘤细胞； 

杂交瘤细胞株分泌抗喹诺酮类药物单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-7以上，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链，该单克隆抗体能与喹诺酮类药物环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、达氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星、麻保沙星、沙拉沙星和双氟沙星有特异性免疫反应。

抗喹诺酮类药物单克隆抗体在食品中该类抗生素残留检测上的应用是以单克隆抗体为核心建立的各种免疫学检测方法及其试剂盒和试纸条。