[发明专利]分泌抗南方水稻黑条矮缩病毒单抗杂交瘤细胞株及其单抗应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种分泌抗南方水稻黑条矮缩病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗的应用。 

背景技术

南方水稻黑条矮缩病于2001年首次在广东阳西县发现，此后发生范围逐步扩大，为害日趋严重。2008年扩散至长江流域，2009年该病毒病在我国的发生面积约4O万hm²，晚稻严重受害，超过0.67万hm² 水稻基本失收。2010 年该病害在我国广西、广东、江西、湖南、福建、贵州、云南、浙江、安徽、海南等13个南部省份暴发成灾，发病面积约133 万hm²，中晚稻区出现多处点片绝收，给我国的水稻生产造成巨大损失。2011年该病毒病仍在湖南、贵州、安徽、云南等多个南方省份发生流行。近年来越南南方水稻黑条矮缩病在越南暴发成灾。南方水稻黑条矮缩病由南方水稻黑条矮缩病毒(Southern rice black streaked dwarf virus，SRBSDV)引起，该病毒为呼肠孤病毒科 (Reoviridae)斐济病毒属(Fijivirus)的一个新种。该病毒可侵染水稻、玉米、薏米、白草和稗草等多种禾本科作物和杂草，引起水稻和玉米南方黑条矮缩病。病毒粒体球状，直径70～75 nm。病毒基因组为双链RNA(dsRNA)，共10个片段，由大到小分别命名为SI～S10，其中S10编码病毒的外壳蛋白。由于SRBSDV引起的水稻南方黑条矮缩病最明显的症状为植株矮缩，不同田块间发病率存在显著差异，而且杂交稻发病重于常规稻。水稻的各个生育期均可受到SRBSDV侵染，但不同生育期的稻株感病后表现症状有所不同：秧苗期感病的稻株严重矮缩，不能拔节，移栽大田后重病株死亡；大田初期感病的稻株明显矮缩，叶色深绿，上部叶的叶面可见凹凸不平的皱褶，拔节期地上数节节部有气生须根及高节位分枝，病株茎秆表面有乳白色大小约1～2 mm的瘤状突起，瘤突呈蜡点状纵向排列成一短条形，早期乳白色，后期褐黑色，不抽穗或仅抽包颈穗；分蘖期和拔节期感病稻株矮缩不明显、能抽穗，但穗型小、实粒少、粒重轻。该病毒由白背飞虱传毒，不能经种传播，植株间也不互相传毒。病毒可在白背飞虱体内繁殖，白背飞虱一旦获毒，即终身带毒，若虫及成虫均能传毒，且白背飞虱高效传毒，水稻病株上扩繁的二代高龄若虫，可80% 带毒。1990年代以后，杂交水稻种植面积的大幅度增加和吡虫啉的大范围高强度施用，使白背飞虱逐渐取代褐飞虱而成为优势种群，近年来我国南方大部稻区白背飞虱连年暴发，年均发生面积2亿亩左右。白背飞虱是一种典型的迁飞性害虫，早春白背飞虱随西南气流从中南半岛的越南等国家迁入我国，并在我国稻区降落繁殖，使SRBSDV随白背飞虱传入我国稻区并造成发生为害。白背飞虱大区域发生远距离迁飞特性使SRBSDV暴发并造成流行蔓延的风险大大增加。随着境外毒源积累，近年该病害发生处于上升时期，在耕作制度及气候无明显改变的条件下，我国南方水稻黑条矮缩病暴发态势仍将延续。白背飞虱带毒情况及发生数量成为南方水稻黑条矮缩病发病流行的重要因素。为了掌握白背飞虱自然种群带毒及水稻发病状况，强化我国南方水稻黑条矮缩病早期监测和预警，科学指导防控，急需建立检测白背飞虱体内及水稻中SRBSDV的高通量的检测方法，而目前没有这种高通量的检测方法，仅用低效率的电镜观察、RT-PCR方法、核酸电泳等方法进行小样本检测。本发明以合成的SRBSDV衣壳蛋白（CP）的多肽为抗原通过杂交瘤技术制备了1株分泌抗SRBSDV的特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，以制备的单抗为核心可建立检测SRBSDV的高通量的血清学方法及其试剂盒，从而为我国南方水稻黑条矮缩病早期监测和预警，科学指导防控提供物质和技术支持。 

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种分泌抗南方水稻黑条矮缩病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其单抗应用。 

分泌抗南方水稻黑条矮缩病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株，保藏号为CGMCC No.5535，它能分泌抗水稻南方黑条矮缩病毒的单克隆抗体。 

抗南方水稻黑条矮缩病毒的单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10^-6以上，抗体类型及亚类为IgG1、kappa链，该单克隆抗体能与南方水稻黑条矮缩病毒56kD的外壳蛋白亚基有特异性免疫结合反应。 

抗南方水稻黑条矮缩病毒单克隆抗体在该病毒检测上的应用是以单克隆抗体为核心建立的各种免疫学检测方法和免疫学试剂盒。